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目的：癫痫是神经系统慢性疾病中的一种常见病、多发病,主要发生在青少年和中青年,大部分患者用现有的抗癫痫药物能有效控制发作,但仍有20%-30%的癫痫患者治疗效果差,不能有效控制发作,称为难治性癫痫。其发病机制尚不完全清楚,一直是研究的热点。细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的变化和钙稳态失调可能在难治性癫痫的发生发展中起着重要作用。膜联蛋白A7(annexin A7,ANXA7)是膜联蛋白家族中的一员,是依赖Ca2+的磷脂结合蛋白,主要功能是调节细胞内钙稳态和胞吐等。本文预通过比较ANXA7在难治性癫痫患者与脑外伤患者颞叶脑组织中、匹罗卡品致痫大鼠动物模型脑组织和对照组脑组织中表达情况的差异,探讨ANXA7在难治性癫痫发生发展演变中的作用,对于开发新的抗癫痫药物,改善难治性癫痫患者的预后可能会起到作用。方法：从已经建立的难治性癫痫患者脑组织库中按照随机化的原则分别抽取38例难治性癫痫患者颞叶脑组织(实验组)和11例对照组患者的颞叶脑组织,运用免疫组化、免疫荧光双标和western blot对ANXA7表达部位和表达量进行测定,探讨其与难治性癫痫的关系。为了更好的分析ANXA7与难治性癫痫的关系,我们另采用氯化锂-匹罗卡品诱导的慢性癫痫动物模型,分别在癫痫发作后6h,24h,48h,72h,7d,15d,1m,2m(n=72)断头取脑,并与对照组(n=9)比较。运用免疫组化和免疫荧光双标技术对ANXA7的表达量和亚细胞定位进行测定,进一步探讨ANXA7在难治性癫痫发病机制中的作用。结果：1癫痫患者和对照组1.1临床特点比较：实验组对照组的年龄、性别、所取脑组织的解剖部位差别无统计学意义(P>0.05)。难治性癫痫患者当中,92.1%的患者病程超过5年,68.4%的患者病程超过10年。1.2免疫组化示ANXA7在难治性癫痫患者颞叶脑组织中的OD值为0.3641±0.04197(x±s),对照组的OD值为0.1824±0.02123(x±s)(P<0.05)；免疫蛋白印迹示难治性癫痫患者颞叶脑组织相对灰度值为0.4631±0.26610(x±s),对照组的相对灰度值为0.2438±0.14948(x±s)(P<0.05),免疫组化和免疫印迹的结果一致：实验组和对照组的差异具有统计学意义。1.3免疫荧光双标探讨ANXA7的细胞定位,将ANXA7抗体与神经元特异性烯醇化酶(NSE)抗体进行荧光双标,发现ANXA7与NSE共表达,说明ANXA7存在神经元上,特别是神经元的胞浆内。2动物模型2.1行为学观察：氯化锂-匹罗卡品动物模型的行为学改变可分为急性期(6-24h,反复癫痫发作)、静止期(4-16d,发作潜伏期)和慢性期(自发性癫痫发作)。大鼠在匹罗卡品注射后30min内出现流涎、点头、咀嚼、前肢阵挛、跌倒、甚至跳跃,以致全身强直-阵挛发作,体位失去控制。大鼠癫痫发作等级按照Racine发作分级标准判断,Ⅳ以上发作方可用于实验。17%大鼠在癫痫发作后一周内死亡。2.2免疫组化示氯化锂-匹罗卡品诱导的慢性癫痫动物模型各时间点ANXA7的表达量与对照组相比,差异均具有统计学意义(P<0.05),尤其在发病初期明显增高。2.3为了进一步探讨ANXA7的细胞定位,将ANXA7抗体分别和神经元特异性烯醇化酶(NSE)抗体、神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)抗体、碘化丙锭(PI)进行荧光双标,发现ANXA7主要存在于神经元的胞浆内,细胞核内不表达,星形胶质细胞中也不表达。结论：1. ANXA7在难治性癫痫患者颞叶脑组织中和氯化锂-匹罗卡品诱导的慢性癫痫大鼠脑组织中的表达量均增高。2.ANXA7蛋白主要存在于神经元的胞浆内,并不在细胞核内表达,星形胶质细胞中也不表达。3.ANXA7在难治性癫痫的发生发展过程当中可能起着重要的作用。