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多发性骨髓瘤（MM）目前仍是一种难治性造血系统恶性肿瘤。大剂量化疗联合自体干细胞移植的应用明显提高了存活率，但存在着移植后复发的问题，这主要与回输移植物中含有残留的肿瘤细胞有关。为此有必要对移植物进行体外净化，清除残留的肿瘤细胞。近年来研究认为，烷化溶血磷脂（ALP）是一种较为理想的净化药物，它可选择性地杀伤肿瘤细胞，而对正常的造血祖细胞影响甚小。本课题选用ET-18-OCH3（ALP家族中应用最广的一员）作为MM体外净化的药物，处理U266细胞和MM骨髓细胞，研究ALP对骨髓瘤细胞的杀伤作用和骨髓净化效果，旨在为ALP用于MM的体外净化提供实验依据。 本研究主要包括2个部分： （1）ET-18-OCH3对U266细胞的抗肿瘤效应：不同浓度的ET-18-OCH3与U266细胞作用一定时间后，收集这些细胞，进行细胞计数和集落形成实验（CFU-U266）观察ET-18-OCH3对U266细胞的杀伤作用；通过形态学观察、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞技术观察ET-18-OCH3诱导细胞凋亡现象；利用RT-PCR、流式细胞技术检测U266细胞bcl-2、c-myc mRNA水平及蛋白表达率，以探讨ET-18-OCH3杀伤U266细胞的作用机制。结果表明ET-18-OCH3对U266细胞具有明显的细胞毒作用，并可抑制U266Aq4K＃k＃ 99 gg：rff．m－－＄k＆1 ，zvxH细胞集落的形成，这些作用均呈剂量和时间的依赖性；形态学特征及梯状DNA降解片段表明n－18个。还可诱导U266细胞发生凋亡，并具有时效关系：流式细胞技术检测实验组细胞凋亡率为N．53兑而对照组细胞未出现凋亡现象；RT干CR结果显示经ETl0。处理后U266细胞的b＊七、旷叮cInRNA表达明显减少，分别减少了原来的86％和72协 流式细胞技术检测结果显示U266细胞的BCI六儿仇yC蛋白水平也明显下降，阳性率分别下降了原来的 17％和 60儿 门)ETl刁。对删骨髓的体外净化作用：MM患者骨髓细胞与75u g／ml ET18－OCH。作用 4h后，利用流式细胞技术检狈 CD38”CD56”CD45－细胞数的变化、半巢式 PCR检测蛇H CDRlll基因的变化及粒－单核系造血祖细胞集落形成实验JFU－GM)研究 ET习十。对 W患者骨髓体外净化的效果；利用流式细胞技术检测正常骨髓CD34”细胞和 CFU｛M的变化分析ETl刁。对正常造血祖细胞的影响；利用RT干CR、流式细胞技术检测 MM ＄者骨髓细胞 bC刁、C皿 InRN及蛋白的变化，以探讨ET－18－OCH。体外净化删的作用机末。结果表明 ET－18－OCH。可有效地杀伤骨髓瘤细胞，使删患者骨髓m38℃仍讥M5细胞及蛇HmRHI基因表达明显减少；但不影响删患者的造血功能，作用后删患者的CFU｛M无明显变化。ET叫刁。对正常的造血祖细胞影响甚小，作用后正常骨髓CD34”细胞与CFU｛M均无明显变化；RT干CR、流式细胞技术检测结果显示经 ET－18－OCH。处理后删患者骨髓细胞的仇－2、c－myc。RNA水平及蛋白表达率均有所下降。 结论：＊)ET、刁。可有效地杀伤U266细胞，并可通过下调k七、C－IllyC InRNA及蛋白的表达，诱导U266细胞发生凋亡，具有显著的抗肿瘤效应。Q)ETIS个。可有效地杀伤骨髓瘤细胞，而对正常的造血祖细胞影响甚小，可用于MM患者骨髓的体外狰化。