牛乳β-乳球蛋白(β-lg)是胎儿出生后遇到的第一个外来过敏原,并且它是导致牛乳蛋白过敏的主要过敏原。酶水解作用可以导致β-lg空间三维结构的变化,但是该酶诱导结构变化对其致敏性的意义还不清楚。为了探明水解作用对β-lg致敏性或者抗原性的影响,本实验利用小鼠动物模型研究了水解作用对β-lg致敏性的影响。本研究主要从以下几个方面探讨了水解降低β-lg致敏性的机制:脾淋巴细胞增殖实验;ELISA方法检测血清和小肠液中的IgE水平;利用试剂盒检测血浆中组胺水平;还检测了脾淋巴细胞培养上清中各种细胞因子(IL-2,IL-4,IL-10,IFN-γ)水平,脾淋巴细胞表面抗原(CD4+,CD8+,CD3+,CD19+)。脾细胞是主要的淋巴细胞,本试验通过淋巴细胞增殖试验来研究β-lg,和β-lg水解物在体内免疫调节作用,不加ConA组数据表明,和β-lg水解物以及OVA组相比,β-lg能够显著刺激脾淋巴细胞增殖(分别为p=0.01, p=0.001),β-lg水解物和OVA相比,差异也是极显著的。(p=0.002)。并且,加ConA的各组与不加ConA的实验组相比有相同的趋势。例如β-lg组和酶β-lg水解物组以及OVA组相比,差异都显著(分别为p=0.007,p=0.001)。除此之外,添加ConA和不添加ConA实验组相比,整体趋势是不添加ConA组要比添加ConA组有较大的刺激性(p=0.508β-lg vsβ-lg+ConA)。使用ELISA方法检测了小鼠血清和小肠液IgE抗体水平,结果表明β-lg组小鼠血清IgE水平要高于β-lg水解物组小鼠,而小肠液中IgE水平和血清IgE水平变化趋势一致,但是整体水平要高于血清。在本试验中,血浆组胺是通过ELISA试剂盒检测的,结果表明,灌胃β-lg组小鼠血浆组胺水平显著高于酶解β-lg组和OVA组(分别为p=0.002,p=0.000)。酶解β-lg组血浆组胺水平也显著高于OVA组(p=0.007)。本实验还检测了脾淋巴细胞培养上清中Th1型细胞因子(IL-2,IFN-γ)和Th2型细胞因子(IL-4,IL-10)。在脾细胞培养液中加入β-lg和β-lg水解物,和对照组细胞相比,对其细胞因子分泌水平影响不大,差异不显著。但是,在有ConA存在时,β-lg显著的刺激了IL-4,IL-10,IFN-γ的分泌。除此之外,由于β-lg的存在,抑制了ConA刺激的脾细胞中IL-2的表达,但是和空白组相比差异不显著。另一方面,β-lg水解物增加了IFN-γ在ConA刺激的脾细胞中的表达,但是对其他细胞因子的分泌没有影响。这些结果说明,β-lg水解物不但能够抑制脾细胞增殖,还对细胞因子的分泌有调节作用。创新点:对水解作用对β-lg致敏性的影响进行了系统的研究。利用β-lg作为致敏原,balb/c小鼠为动物模型,研究血清IgE,血浆组胺水平,细胞因子水平,细胞表面抗原,解释了水解作用降低β-lg致敏性的免疫学机制,为信号转导、体液免疫等进一步研究过敏降低机制提供了参考。