斑节对虾(Penaeus monodon)俗称草虾、虎虾,是我国海水养殖的重要经济种类。目前,斑节对虾亲虾的全人工养殖技术已经取得了巨大的突破和进展,但在繁育过程中,传统剪眼柄的促熟方式常造成一定的死亡。因此,寻找诱导性腺成熟的新方法,研究性腺发育相关调控激素至关重要。斑节对虾的性腺发育调控除了受到激素的调节作用,还受到多种神经递质的影响和调控,但对与哺乳动物类似的、直接作用于性腺器官的性激素研究较少。促性腺激素释放激素(Gonadotropin-releasing hormone)是一种重要的神经激素,对动物繁育起重要作用。本研究通过液相色谱技术对斑节对虾卵巢组织和脑组织提取液中Gn RH进行初步分离,确定了卵巢组织和脑组织粗提液中Gn RH的存在,并对分离方法进行探索。最近,在甲壳动物中发现了一种与哺乳动物卵泡刺激激素(Follicle-Stimulating Homne,FSH)类似的激素,命名为甲壳动物雌性激素(Crustean female sex hormone,CFSH),并被认为与甲壳动物卵巢发育调控相关。因此本实验克隆获得斑节对虾CFSH基因,并对其应激应答及相关功能机制做出相关探究。本研究得到结果如下:1促性腺激素释放激素初步分离利用斑点免疫鉴定技术从斑节对虾卵巢组织及脑组织粗提物中均鉴定出Gn RH的存在。对粗提液进行初步尝试分离,发现流动相B梯度从5%到35%可以得到较好的分离色谱图。卵巢粗提液中Gn RH类似物的鉴定为斑节对虾Gn RH分离纯化提供了新的参考依据。2甲壳动物雌性激素CFSH的克隆及其多功能性探究通过RACE(Rapid-amplification of c DNA ends)法克隆并获得斑节对虾甲壳动物雌性激素基因Pm CFSH的ORF及3’UTR,预测编码214 aa的蛋白,其含有信号肽和1个与免疫应答相关的白介素17E(IL-17E)结构域。q RT-PCR结果显示,Pm CFSH在各个组织中均有表达,其中在腹神经组织中的表达量最高;在受精卵时期到仔虾期表达量呈现逐渐上升趋势,其中在仔虾期表达量最高;在卵巢发育Ⅱ到Ⅳ期,随卵巢发育成熟表达量逐渐升高;鉴于Pm CFSH中存在的IL-17结构域,我们想要探索Pm CFSH是否在免疫应答中发挥响应,菌刺激结果表明哈维氏弧菌和金黄色葡萄球菌菌均能上调Pm CFSH表达。研究表明,Pm CFSH不仅参与幼体发育以及性腺成熟的调控,对细菌的应激也具有免疫应答响应,体现了激素的“多功能性”现象。3甲壳动物雌性激素CFSH基因的干扰实验干扰结果显示,Pm CFSH的表达降低可能会促进雄虾性腺组织的发育和精子的发生。但从组织观察结果来看,对Pm CFSH基因进行干扰会导致雄性精荚中精子畸形率的上升,但对雌性斑节对虾的性腺发育的影响还有待进一步探究。