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背景及目的食管癌(esophageal carcinoma)是常见的消化系统恶性肿瘤,严重威胁人类的健康；研究其发病机制将有助于临床诊治。流行病学及病因学研究证实,食管癌的发生与地理环境、遗传因素、生活习惯、年龄、性别、职业、种族等有密切的关系。多数食管癌患者在确诊前已经发生外侵、转移。肿瘤的发生及转移是一个多因素、多步骤的过程,涉及到癌基因及抑癌基因的表达失调、细胞周期调控失常等多方面机制。核转录因子-1(transcription factors-1, E2F-1)是核转录因子E2Fs家族的重要成员之一,其通过对细胞转录、增殖、凋亡等活动的调节,可使细胞由G1期进入S期,与肿瘤细胞的凋亡、细胞增殖和发育有密切的关系。增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen, PCNA)在细胞周期过程起到重要的作用；PCNA的合成和表达代表着细胞的增殖状态,被认为是反映细胞增殖活性的良好指标。小鼠双微体(murine double mimute 2, MDM2)基因是一种癌基因,p53是一种重要的肿瘤抑制基因,二者可调节细胞周期,参与大多数肿瘤的发生、发展。本研究采用免疫组织化学方法研究E2F-1、PCNA、MDM2及p53在高发区食管鳞癌组织中的表达情况,探讨其在食管鳞癌发生、发展中的作用及其与食管鳞癌临床病理特征的关系,为食管鳞癌的临床诊断和治疗提供基础理论。材料和方法1标本本研究随机选取林州市肿瘤医院2008年8月～2009年3月手术切除的食管鳞状细胞癌标本49例,并同时提取距肿瘤大于5cm处的正常食管组织作为对照组；全部标本经10%中性福尔马林液固定,常规石蜡包埋。49例患者中男性27例、女性22例,年龄46～87岁,平均年龄为(60.40±8.60)岁。所有病例均按照国际抗癌联盟食管癌分期标准进行分期：其中Ⅰ期5例、Ⅱ期31例、Ⅲ期13例。分化程度：其中高分化10例、中分化26例、低分化13例；浸润深度：20例浸及纤维膜、29例未浸及纤维膜；19例患者有淋巴结转移、30例患者无淋巴结转移。所有患者术前均未行放、化疗及其它抗癌治疗。2研究方法每例标本4μm厚连续切片6张,4张供免疫组化染色用,1张供HE染色、1张备用。采用免疫组织化学法检测E2F-1、PCNA、MDM2和p53的表达情况。3免疫组化结果判定阳性染色指细胞内出现棕黄色或棕褐色颗粒,E2F-1、PCNA、MDM2和p53阳性表达定位于细胞核。每张切片随机选择10个不重复的高倍视野(40×10倍),每个视野计数100个细胞,计算阳性细胞占总体细胞的百分比；规定无明确阳性细胞或阳性细胞百分比<15%为阴性(-),阳性细胞百分比≥15%为阳性。4统计学方法所有数据采用SPSS13.0统计学分析软件进行处理；样本阳性率的比较采用χ2检验,相关性分析采用Pearson相关性分析。检验水准取α=0.05。结果1 E2F-1的表达E2F-1在癌旁正常食管组织中的阳性表达率为8.16%,在食管鳞癌组织中为51.02%,差异有统计学意义。E2F-1在有、无淋巴结转移组中的阳性表达率为78.95%和33.33%；E2F-1在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期中的阳性表达率为20.00%、35.48%和84.62%；E2F-1在高-中、低分化组中的阳性表达率为38.89%和84.62%；E2F-1在浸及与未浸及纤维膜组中的阳性表达率为70.00%和37.93%。E2F-1的表达与性别、年龄无关,与淋巴结转移情况、分化程度、浸润深度及TNM分期有关(P<0.05)。2PCNA的表达PCNA在癌旁正常食管组织中的阳性表达率为8.16%,在食管鳞癌组织中为69.39%,差异有统计学意义。PCNA在有、无淋巴结转移组中的阳性表达率为94.74%和53.33%；PCNA在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期中的阳性表达率为20.00%、67.74%和92.31%；PCNA在高-中、低分化组中的阳性表达率为58.33%和100.00%；PCNA在浸及与未浸及纤维膜组中的阳性表达率为90.00%和55.17%。PCNA的表达与性别、年龄无关,与淋巴结转移情况、浸润深度、分化程度及TNM分期有关(P<0.05)。3 MDM2的表达MDM2在癌旁正常食管组织中的阳性表达率为22.45%,在食管鳞癌组织中为55.10%,差异有统计学意义。MDM2在有、无淋巴结转移组中的阳性表达率为84.21%和36.67%；MDM2在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期中的阳性表达率为20.00%、45.16%和92.31%；MDM2在高-中、低分化组中的阳性表达率为44.44%和84.62%；MDM2在浸及与未浸及纤维膜组中的阳性表达率为75.00%和41.38%。MDM2的表达与性别、年龄无关,与淋巴结转移情况、分化程度、浸润深度及TNM分期有关(P<0.05)。4 p53的表达p53在癌旁正常食管组织中的阳性表达率为12.24%,在食管鳞癌组织中为61.22%,差异有统计学意义。p53在有、无淋巴结转移组中的阳性表达率为84.21%和46.67%；p53在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期中的阳性表达率为0.00%、61.29%和84.62%；p53在高-中、低分化组中的阳性表达率为52.78%和84.62%；p53在浸及与未浸及纤维膜组中的阳性表达率为80.00%和48.28%。p53在食管鳞癌中的阳性表达与性别、年龄无关,与淋巴结转移情况、TNM分期、分化程度及浸润深度有关(P<0.05)。5相关性分析结果显示,PCNA在食管鳞癌组织中的表达与E2F-1、MDM2、p53之间分别存在正相关,关联系数分别为0.308、0.424、0.355；E2F-1在食管鳞癌组织中的表达与MDM2之间存在正相关,关联系数(r)为0.455；在食管鳞癌组织中E2F-1与p53的表达之间、MDM2与p53的表达之间无明显相关性。结论1 E2F-1、PCNA、MDM2和p53与食管鳞癌的发生有关；2 E2F-1、PCNA、MDM2和p53的表达与患者的年龄、性别无关；与食管鳞癌的浸润深度、淋巴结转移情况、分化程度及TNM分期有关；3PCNA与E2F-1、MDM2、p53之间以及E2F-1与MDM2在食管鳞癌的发生、发展过程中有协同作用。