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第一部分mi R-141与膀胱癌诊断预后相关性研究目的:分析微小RNA-141(mi R-141)与膀胱癌临床病理分期相关性及评估mi R-141预测膀胱癌预后价值。方法:选取114例膀胱癌患者癌肿及癌旁正常组织,采用实时荧光定量PCR方法检测mi R-141并与患者临床病理分期及随访数据进行相关性分析。比较肿瘤组织和癌旁组织中mi R-141表达水平差异,mi R-141表达与肿瘤分级、是否肌层浸润间关系采取t检验。mi R-141表达和肿瘤分期间相关性分析采取单因素方差分析。mi R-141和肿瘤特异性生存间相关性采取log-rank检验和Cox回归分析,同时将肿瘤分期、分级、患者性别进行多变量方差分析。结果:显示膀胱癌组织中mi R-141表达增高,并与肿瘤分级(P<0.001)、分期(P<0.001)、侵袭性(P<0.001)相关。Log-rank检验显示高mi R-141表达和膀胱癌患者较长无病生存期呈相关性(P<0.001),同时使用单变量分析和COX回归分析得到证实(P<0.001 and P=0.039)。对于非肌层浸润性膀胱癌患者,单因素log-rank和COX分析显示高mi R-141表达和无病生存期相关I(P=0.031,P=0.040),亦和疾病特异性生存相关(P=0.028,P=0.038),同时使用多因素COX分析亦得到证实(P=0.036,P=0.042)。结论:mi R-141与膀胱癌进展相关,其表达增高成为膀胱癌预后良好独立预测指标。表明mi R-141可成为膀胱癌危险分层的潜在生物学指标。第二部分唑来膦酸在膀胱癌葡萄糖代谢中作用机制研究目的:研究唑来膦酸对膀胱癌细胞生长和葡萄糖代谢的影响。方法:比较唑来膦酸干预前后膀胱癌细胞生长、葡萄糖的摄入和NADPH产生的差异,定量RT-PCR结合western blot检测TAp73和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)表达差异;通过建立TAp73过表达的膀胱癌细胞系,验证唑来膦酸对磷酸戊糖途径的抑制作用是否在TAp73过表达的情况下有所改变;以Ras抑制剂替代唑来膦酸处理膀胱癌细胞,western blot检测Ras活性,TAp73和G6PD的表达,检测细胞葡萄糖的摄入和NADPH产生的差异;敲除TAp73后,检测G6PD的表达、葡萄糖摄取和细胞增殖水平。结果:唑来膦酸在膀胱癌细胞中能够抑制细胞增殖和磷酸戊糖途径(PPP)、G6PD。此外,唑来膦酸处理后,TAp73稳定性、Ras-GTP表达水平亦出现下降。Ras抑制剂替代唑来膦酸处理膀胱癌细胞后亦能够显著减少TAp73,G6PD和PPP表达水平。唑来膦酸对于磷酸戊糖途径的抑制作用,在TAp73过表达的影响下受到削弱。应用sh RNA干扰TAp73后能够减少PPP表达水平同时消除唑来膦酸对于PPP表达水平的影响。结论:在膀胱癌细胞中,唑来膦酸通过抑制Ras活性,从而阻断TAp73介导的PPP过度激活,达到抗肿瘤效果。