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冠状动脉粥样硬化性心脏病(简称冠心病，coronary artery disease，CAD)是一种威胁人体健康的重要的疾病，其发病率和死亡率逐年上升。流行病学调查显示冠心病与多种遗传因素有关，尤其是参与脂代谢的多个基因在冠心病的发生发展中起着重要作用，这是因为血脂紊乱是导致冠心病发生发展病理演变的必要前提。在哺乳动物中，卵磷脂胆固醇酰基转移酶(lecithin：cholesterol acyltransferase，LCAT)是胆固醇逆向转运回肝代谢的关键酶，参与维持血浆胆固醇的稳态平衡，调节高密度脂蛋白(high density lipoprotein HDL)等脂蛋白代谢，具有抗动脉粥样硬化功能，是CAD的易感基因之一。 随着人类基因组测序的完成，研究与疾病表型相关的序列变异已成为医学遗传学的一个主要课题。单核苷酸多态(Single-nucleotide polymorphism，SNP)作为第三代遗传标记，具有数量大，分布广的特点。系统地在群体水平上筛查鉴定SNP，特别是编码区和基因调控区的SNP，并通过病例-对照组间的比较和统计学分析，有可能获得与疾病相关联的SNP位点或单倍型。这对于阐明某些复杂的多基因疾病的遗传机理具有重要意义。 本课题通过对中国汉族以D患者和正常个体中LCAT基因已知cSNP的研究和未知cSNP的筛选，比较这些cSNP在患者和正常对照人群中的分布，揭示LCAT基因cSNP与脂代谢紊乱及冠心病的关系，以期阐明其在CAD发生发展中的作用。 首先，我们采用聚合酶链反应一限制性片断长度多态性 (pol卿erase ehain reaetion一restrietion fra脚ent lengthpolymorphism，PCR一RFLP)方法研究了我国正常人和CAD患者中3个已知eSNp位点(6o8C>T，91 IT>C和1188C>T)的分布频率，并初步探讨它们与脂代谢和冠心病的关系:其次，运用DHPLC技术筛查忧AT基因外显子区域未知的csNP，进一步通过测序和PCR一RFLP方法验证后，对这些cSNP与脂代谢和以D的相关性进行了统计学分析。 对3个己知cSNP位点的研究结果显示，在中国人群中仅存在6OSC>T多态位点。在对照组中，两种等位基因的频率分别为97.13% (608C)和2.87%(608T)，而在CAD患者组中为99.26%(608C)和0.7钱(608T)，等位基因频率分布符合Hardy哪einberg平衡。经卡方检验，该位点等位基因(尸=0.034)和基因型频率(尸二0.032)分布在对照组和患者组间差异显著，以D组6OST频率显著低于对照组，提示L以T基因的608C>T多态位点可能与以D相关。从患者组血脂水平的变化来看，有6OST的HDL{水平显著高于无608T的患者(尸二0.015)，表明608T等位基因与以D患者较高的血浆HD卜C水平相关联。 运用PCR一DHPLC、DNA测序和RFLP方法发现了1个新的cSNP，即位于第四外显子的5llC>T(P 143L)，在190例以D患者中共检出了n个杂合子，但未见纯合子。在患者组中的基因型和等位基因频率分别为5.79%和2.89%，等位基因频率分布符合Hardy--Weinberg平衡。与此同时，在209例对照中没有检出上述多态。进一步将患者组按HD卜C水平正常与否分为HDL代谢紊乱亚组(LHDL，1。，HDL{level，表现为HDL一C降低)和HDL代谢正常亚组(NHDL，normal HDL一level)。经卡方检验，患者组中该位点等位基因及基因型频率不仅在LHDL和NHDL两亚组组间，并且在两亚组的男性间有显著性差异，而且通过logister线性回归分析，5llT在以D两亚组和两亚组男性间与HDL代谢紊乱有着显著性相关，其odds一Ratios(ORs)[9溅可信区间〕分别为5.754[1.893一13.785]和7.003[2.243一21.859〕。表明5llC>T(P143L)这一新的多态位点与CAD患者中HDL代谢紊乱显著相关。 除此之外，我们还发现了3个新的cSNP，即位于第一外显子的52T>A(L一1 IQ)、第六外显子的1230A>G(5383G)和1278C)T(R399C)。其中1230A>G(5383G)等位基因(尸=0.061)和基因型频率(尸二0.058)经卡方检验在正常对照组和以D患者组间差异不显著，因此该位点与脂代谢紊乱及以D可能无明显相关性。其余两个位点频率小于1%，故未作进一步的讨论。