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目的研究表明趋化因子受体在许多肿瘤细胞表达，与肿瘤细胞的迁移与转移有密切关系。本研究拟探讨趋化因子受CXCR4及其配体CXCL12在肝细胞癌细胞、肝癌组织中的表达及在肿瘤迁移中的作用。研究方法(1)采用RT-PCR和Western Blot检测43例肝细胞癌组织及癌旁组织和肝细胞癌细胞株MHCC97、人脐静脉内皮细胞株(Humanumbilical vein endothelial cells，HUVECs)中CXCR4的表达。(2) RT—PCR检测13例肝细胞癌淋巴转移结节、43例肝细胞癌组织内的CXCL12的表达。(3) ELISA法检测33例患者腹水中趋化因子配体CXCL12的含量。(4)以48孔微趋化板(Boyden Transwells)检测重组人CXCL12、肝细胞癌癌性腹水对MHCC97和HUVECs的趋化影响。(5)构建反义CXCR4重组载体pcDNA-X4，转染肝癌细胞株MHCC97，建立稳定转染的细胞株，RT-PCR及流式细胞仪分别从mRNA水平和蛋白质水平检测其表达CXCR4表达变化的情况，趋化实验观察转然反义CXCR4的肝癌细胞的迁移能力的变化。(6)将稳定转染反义CXCR4基因的肝癌细胞、转染空白质粒的肝癌细胞及未转染的肝癌细胞注射到Balb／c裸鼠右后肢背侧皮下，定期观察肿瘤生长情况，10周后处死Balb／c裸鼠，切下生长的肿瘤组织，称重，比较各组间是否存在差异。同时切取布局肿大的淋巴结和裸鼠肺组织，提取总RNA，RT-PCR检测肿瘤转移情况。结果(1)在肝细胞癌组织、MHCC97及HUVECs中，CXCR4 mRNA的相对表达量分别为2.52±1.13，2.34±1.16 and 1.63±1.26；CXCR4蛋白的相对表达为1.38±0.13，1.96±0.32 and 1.86±0.21。在正常肝组织中均未检测到CXCR4 mRNA及蛋白的表达。(2)在43例肝癌患者中，癌性腹水定量检查结果显示，CXCL12含量为783-8，364pg／ml，肝细胞癌淋巴结组织中，CXCL12 mRNA表达量的平均值为1.21±0.87，在正常肝组织中未检测出CXCL12的表达。(3)重组人CXCL12可诱导MHCC97和HUVECs细胞的迁移，其趋化指数分别为3.9±1.2和4.1±1.6，与其对照(1.0±0.4和1.1±0.7)比较有显著性差异(P＜0.05)。肝细胞癌癌性腹水可诱导MHCC97细胞的迁移，其趋化指数为1.9±0.8，与对照组(趋化指数为1.0±0.4)比较有显著差异性(P＜0.05)。(4)经PCR和限制性核酸内切酶EcoRI、EcoRV双酶切鉴定，成功构建了人反义CXCR4基因的重组体pcDNA-X4。(5)将pcDNA3.1(-)和pcDNA-X4质粒分别转染肝癌细胞MHCC97，经抗生素G418筛选获得稳定细胞株后，分别用RT-PCR及流式细胞仪从mRNA水平和蛋白质水平检测CXCR4的表达，发现转染有pcDNA-X4的MHCC97细胞株中CXCR4的表达量明显下降，具有显著性差异(P＜0.05)。(6)趋化实验表明，在人重组CXCL12的作用下，转染pcDNA-X4的肝癌细胞，与转染pcDNA(-)的肝癌细胞及未转染质粒的肝癌细胞相比，其迁移能力明显下降，具有显著性差异(P＜0.05)。(7)将转染pcDNA-X4的肝癌细胞，与转染pcDNA3.1(-)的肝癌细胞及未转染质粒的肝癌细胞注射到Balb／c裸鼠右后肢背侧皮下，观察发现，转染pcDNA-X4组的肿瘤生长较为缓慢，最早第19天才出现肿瘤，而转染pcDNA3.1(-)组和为转染质粒组最早则在第15天就出现肿瘤，且肿瘤生长速度明显快于pcDNA-X4组。(8)第10周后处死Balb／c裸鼠，剥离肿瘤组织，称重，发现pcDNA-X4组的肿瘤组织明显小于pcDNA3.1(-)组和未转染组，肿瘤组织平均大小分别为pcDNA-X4组0.175±0.09g、pcDNA3.1(-)组0.656±0.255和未转染组0.660±0.253，pcDNA-X4组与pcDNA3.1(-)组和未转染组，具有显著性差异(P＜0.05)。(9)切取局部肿大淋巴结，RT-PCR检测发现，pcDNA3.1(-)组和未转染组均有局部淋巴结的浸润，虽然在pcDNA(-)组发现一例局部淋巴结不肿大，而在pcDNA-X4组虽然有2例局部淋巴结肿大，但未检测到人GAPDH。切取肺部组织，RT-PCR检测发现，pcDNA3.1(-)组中有3／5例发生肺部转移，而pcDNA-X4组在肺部未检测到人GAPDH，提示尚未出现肺部转移。结论(1) CXCR4／CXCL12受体配体可介导肝细胞癌及HUVECs细胞迁移，这可能与肝细胞癌的转移有着密切关系。(2) CXCR4在88.37％的肝癌组织中表达，说明肝癌的转移除了与CXCR4／CXCL12生物轴有关外，还与其他因素相关。(3)下调CXCR4表达，能有效抑制肝癌细胞的趋化运动，可以抑制肝癌的转移。