【摘 要】
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目的:探讨Corilagin通过抑制Wnt7B/β-catenin影响胶质瘤干细胞恶性进展的作用。方法:1.使用常规方法培养人脑胶质瘤U251细胞,分离,培养U251胶质瘤干细胞。使用敲低Wnt7B的慢病毒载体处理培养后的U251胶质瘤干细胞构建实验组模型,使用空白慢病毒载体处理培养后的U251胶质瘤干细胞构建空白组模型。使用未经处理的U251胶质瘤干细胞构建对照组模型。使用q PCR和免疫荧光镜
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目的:探讨Corilagin通过抑制Wnt7B/β-catenin影响胶质瘤干细胞恶性进展的作用。方法:1.使用常规方法培养人脑胶质瘤U251细胞,分离,培养U251胶质瘤干细胞。使用敲低Wnt7B的慢病毒载体处理培养后的U251胶质瘤干细胞构建实验组模型,使用空白慢病毒载体处理培养后的U251胶质瘤干细胞构建空白组模型。使用未经处理的U251胶质瘤干细胞构建对照组模型。使用q PCR和免疫荧光镜下观察共同评估慢病毒转染效率。根据前期实验结果选择使用100μg/ml浓度的Corilagin对3组上述细胞模型进行干预。使用蛋白印迹技术检测干预后3组U251胶质瘤干细胞的Wnt7B/β-catenin的表达情况。使用CCK-8检测3组细胞模型的增殖情况。使用流式细胞术检测3组细胞模型的细胞凋亡及细胞周期。2.依据上述方法获得敲低U251胶质瘤干细胞的实验组模型和未敲低U251胶质瘤干细胞的对照组模型,每个干预浓度3只,每组12只,共使用24只4周龄雄性裸鼠,构建裸鼠胶质瘤干细胞皮下种植瘤模型,在第6,9,12,15,18天按照分组以不同浓度（0μg/ml,100μg/ml,200μg/ml,400μg/ml）的Corilagin对荷瘤鼠进行1次灌胃干预处理,每只荷瘤鼠每次灌胃量为1ml。每天观察荷瘤鼠的饮食,精神,体重,群居及打斗等生长行为学变化。每3天测量1次荷瘤鼠的肿瘤生长情况并绘制肿瘤生长曲线。种瘤后21天时处死荷瘤鼠并收集皮下种植瘤。对皮下种植瘤进行HE染色,免疫组织化学染色检测GFAP,P53,ATRX,IDH-1,Ki-67,Wnt7B,β-catenin表达情况。结果:1.实验组和空白组中U251胶质瘤干细胞均有明显的免疫荧光表达。实验组中Wnt7B和β-catenin的表达显著低于空白组。2.使用Corilagin干预3组细胞模型后,CCK-8检测见3组细胞模型均出现细胞增殖能力下降,空白组与对照组下降程度相当,实验组下降幅度较其他2组低（P＜0.05）。3.使用Corilagin干预3组细胞模型后,流式细胞术检测见空白组与对照组细胞凋亡情况相当,实验组细胞凋亡率较其他2组低（P＜0.01）。4.使用Corilagin干预3组细胞模型后,流式细胞术检测见均在G1期出现停滞现象,空白组与对照组情况相当,实验组停滞数量较其他2组低（P＜0.05）。5.裸鼠皮下种植瘤3-4天后,可在裸鼠腋下触及质硬肿物。此后肿物体积不断增大,荷瘤鼠的进食量较前有所减少,精神状态较前差,体重未见明显变化,步态无明显改变,群居及打斗行为未见明显变化。6.未使用Corilagin干预的实验组裸鼠腋下肿瘤明显小于对照组。随Corilagin干预浓度上升,两组荷瘤鼠的肿瘤大小均逐渐下降,实验组肿瘤缩小幅度明显小于对照组（P＜0.05）。7.裸鼠皮下种植瘤组织HE染色见组织细胞形态不一,异形性明显,细胞核大而深染。符合胶质瘤镜下表现。免疫组化示GFAP,P53,ATRX,IDH-1,Ki-67均呈现阳性,符合胶质瘤免疫组化表现。对照组及实验组随干预浓度提高Wnt7B及β-catenin表达逐渐减弱,当使用0μg/ml Corilagin干预时实验组二者表达明显低于对照组。结论:Corilagin能够通过抑制Wnt7B/β-catenin影响细胞周期,抑制胶质瘤干细胞的增殖,促进胶质瘤干细胞的凋亡。
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