大鼠骨质疏松模型的建立和放射状体外冲击波对大鼠骨质疏松模型的干预的相关研究

来源 :河北医科大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:mwzxxlj
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骨质疏松症(osteoporosis, OP)及其所诱发的骨折是严重危害中老年人类健康的疾病。骨质疏松会造成长期的骨丢失和骨微结构的破坏,从而导致骨折的威胁增加。一些药物已经表明能够降低骨质疏松的概率,尽管如此在老年人群中,骨质疏松的发病率依然很高,我们对于骨质疏松的新治疗需求迫切。有研究表明力学刺激可以促进骨质疏松骨组织中的新骨形成、降低骨丢失,从而治疗骨质疏松。体外冲击波(extracorporeal shock wave, ES W)是由电子水压装置、电磁装置等压力瞬间急剧变化产生的一种机械性脉冲波,经冲击波装置二次聚焦后这种机械性脉冲就能形成高能量冲击波,传播的介质可以是固体也可以是液体。在ESW对周围的组织细胞作用的实验中,可以观察到细胞外空化效应、细胞膜通透性增加和分子离子化等,除此之外,这样的作用还能到达原子团、生物分子和细胞器之间。实验证明一定量的应力刺激能够有效的促进体内、外成骨作用。因而近些年来应力化、持续灌流构建的概念多次被学者在骨组织工程构建方式上提出来。作为一种有效的生物力学刺激,体外冲击波在治疗骨不连、骨折延迟愈合、早期股骨头缺血性坏死等疾病中取得满意的效果。它通过机械刺激产生生物力学效应,具有促进细胞增殖与代谢,刺激微血管再生和增强组织修复能力的作用。本实验拟使用体外冲击波干预大鼠的骨质疏松模型,观察体外冲击波是否能够改善骨质疏松的骨组织的小梁改建,增加局部的骨矿含量。第一部分双侧卵巢摘除合并激素注射的大鼠骨质疏松模型的建立目的:探究大鼠合并激素注射去势合并激素注射方法的骨质疏松模型的建立,通过对雌性大鼠双侧卵巢进行摘除并注射甲基强的松龙,2个月后观察大鼠骨质疏松的程度。方法:将24只3.5月龄雌性SD大鼠随机分为手术组(A组)、假手术组(B组)和去势+肌注激素组(C组),每组8只大鼠,A、C组大鼠行双侧卵巢切除术,C组大鼠同时接受肌注甲基强的松龙。术前以及术后1、2月使用双能X线吸收骨密度测量仪监测大鼠骨密度,之后使用micro-CT对离体骨组织进行分析。结果:双能X线骨密度仪测得C组术后8周腰椎和股骨近端的BMD与术前相比分别降低8%和8.3%,与B组同期相比较,分别降低14.6%和15.4%,对离体骨进行]micro-CT分析后,C组胫骨近端的BMD和BMC较B组分别下降了11.1%和10.5%。C组大鼠的BV/TV均值相比较B组下降了23.2%;C组大鼠Tb.N均值相比较B组下降了22.1%;C组大鼠Tb.Th的均值相比较B组下降28.5%;C组大鼠Tb.Sp均值相比较B组增加了47.8%。结论:双侧卵巢切除+甲基强的松龙肌肉注射法建立SD大鼠骨质疏松模型切实可行,造模时间为2个月。第二部分体外冲击波对骨质疏松大鼠胫骨近端部松质骨的影响的实验研究目的:在不同时间点(造模成功后的4周、8周和12周)观察体外冲击波对骨质疏松大鼠胫骨近端部松质骨的成骨作用,以及对骨微结构的影响。方法:选取6月龄的SD骨质疏松大鼠32只,造模方法同实验一。造模成功后立即处死8只大鼠,分离双侧胫骨,进行各项检测后作为0周数据。其余大鼠给与体外冲击波干预,干预部位覆盖右侧胫骨,冲击波能量密度流为0.35mJ/mm2,脉冲为2000次,频率为3Hz,对侧作为对照组。分别在确定造模成功后4周、8周、12周各处死8只大鼠,分离双侧胫骨,处死前14、15天皮下注射25mg/kg盐酸四环素各一次,于处死前4、5天皮下注射钙黄绿素5mg/kg各一次。所有大鼠的双侧胫骨进行micro-CT测量分析,之后双侧样本进行胫骨三点弯实验。在完成三点弯实验后,做骨组织形态计量学分析。得出数据,并用统计软件分析。结果:Micro-CT分析表明,在体外冲击波处理后4周(B组),治疗侧(右侧)胫骨的骨小梁体积分数(BV/TV)相对于基线值(0周)下降17%,同样的数据在非治疗侧为26%;同样的数据在8周时(C组)分别为23%和34%(p<0.05);而在12周(D组)时同样的数据为35%和38%。在胫骨三点弯力学测试中,三个时间点的治疗侧的刚度均比对照侧要高,但仅有4周和8周时的数据具有统计学意义(p<0.05);各组的治疗侧最大负荷均高于对照侧,但仅8周时数据具有统计学意义。三个时间点治疗侧骨矿物质沉积率的与对照侧没有统计学意义。结论:放射状的体外冲击波能够改善骨质疏松骨组织的小梁改建,增加局部的骨矿含量;单次治疗的效果在治疗后的一个月即可被观察到,在治疗后的2个月这种治疗效果达到最大。
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