角膜病是致盲的主要眼病之一。角膜移植是治疗角膜盲的重要复明手术，也是治疗某些顽固性角膜病病变的重要措施。虽然角膜移植手术具有较高的成功率，在无血管植床进行角膜移植，其排斥反应发生率仅为5～10％，但在血管化植床进行的角膜移植或二次角膜移植，其发生率却高达50％以上。因此，免疫排斥反应仍是角膜移植手术失败的主要原因。加强角膜移植免疫排斥反应预防与治疗的研究，对于提高手术的成功率具有重要的意义。 应用免疫抑制剂是目前预防和治疗角膜移植术后免疫排斥反应的主要手段。免疫抑制剂的应用，虽然大大提高了角膜移植的成功率，提高了角膜植片的存活率，但是仍有部分病例排斥反应不能逆转，特别是在高危角膜移植中，免疫抑制剂效果较差。目前广泛使用的免疫抑制剂都是以非特异方式抑制整个免疫系统。而其本身的毒副作用也限制了其长期有效的应用。因此，诱导受体对供体角膜特异性的免疫耐受，将是防止角膜移植排斥的较为理想的方法。 在同种异体移植中，树突状细胞（dendritic cell，DC）通过提呈异体MHC抗原并表达共刺激分子，如CD₈₀、CD₈₆，激活受者初始型T细胞，诱导免疫应答。目前认为，DC既可引起移植排斥，也可诱导移植耐受，这取决于DC的来源及其分化发育状态。成熟DC可以激活静息T细胞而介导移植排斥；不成熟DC由于共刺激分子表达缺陷，而诱导T细胞的无反应性，导致免疫耐受。近来研究证实，将不成熟DC进行受体鼠术前输注，可以明显延长同种异体心脏移植物的存活时间。 转化生长因子-β₁（transforming growth factor-β₁，TGF-β₁）是强力免疫抑制 tiasaml8H1KXi1g．．－－－－－－－－－－－－－－－－－theffi－ 性细胞因子，能影响造血祖细胞（包括DC）的增殖和分化，阻止DC的成熟，诱－＿＿＿。 导同种免疫耐受。因此，TGF民能够作为致耐因子诱导DC的免疫耐受原性。近、－ 来研究发现，TGF民能够对抗免疫排斥反应，在小鼠及大鼠同种异体心脏移植及－。 胰岛细胞移植模型中应用 TGF－民能够明显延长移植物存活时间。表明 TGF民、一 还具有作为免疫抑制剂延长器官移植存活的潜在性。＿ 因此，本研究将在应用TGF－民建立大鼠同种异体角膜移植免疫耐受模型的基，， 础上，进一步探讨TGF－民诱导同种异体角膜植片存活延长的可能机制。为开展同－ 种异体角膜移植免疫耐受的研究提供实验依据。同时，对同种异体角膜移植术后＿。 免疫排斥反应、蚕蚀性角膜溃疡和单疮病毒性角膜基质炎晚期病变局部应用TGF ～ p；治疗进行了初步临床观察。上述研究内容，所阅文献尚未见报道～－ 第一部分TGF pl对大鼠骨髓树突状细胞＿－， 表型及免疫刺激活性的影响＿＿，邑卫 1．目的－－－；研究TGF－p；对大鼠骨髓DC表型及免疫刺激活性的影响。证实TGF小 能够．i 显著抑制骨髓 DC的分化和成熟，抑制辅助刺激分子 CD肪的表达；在体外同种异。。g 体混合淋巴细胞反应中能够诱导出同种异体大鼠T细胞免疫低应答。，3t 2．方法－i 2．l健康近交系SD大鼠作为供体，W幻。大鼠作为受体～g 2二应用细胞因子 rGMCSFO．3n咖l)竹IL4＊刀 ＂g／inl)培养供体大鼠骨髓成熟－－8 DC。应用细胞因子 rGMcSF＊．3n咖1)＋TGF－p，0．sng／ml)培养供体大鼠骨髓未成g 熟DC。g 2．3大鼠骨髓 DC的鉴定：包括光镜及扫描电镜观察、细胞表面标志 Sd 蛋白…－g 免疫组化染色。g’2．4大鼠骨髓DC的细胞表型分析：采用流式细胞仪分析成熟和未成熟DC表面。＠MHC刁类分子和 CD。。分子的表达变化。；gZ．5免疫生物活性检测：采用MTT法测定成熟与未成熟DC刺激同种异体T淋巴82 j量 ～1＄AllEZx1LmAita22＝is1QLtajj；＆2B．－－－－－－．－－－－－－－－．－－－－－－－－－．－－－aretritrithetritheforthethethetri细胞增殖的能力。3．结果3＊ 应用GM－CSF＋IL－4培养的大鼠供体骨髓DC，细胞表型特征是高表达MHC．11类分子及CDs。分子。3．2 应用GM－CSF＋TGF－p；培养的大鼠供体骨髓DC，细胞表面中度表达MHC－11类分子，低表达T细胞共刺激分子CDs。。3．3 同种异体混合淋巴细胞反应显示TGF－p＊C能够显著抑制同种异体T淋巴细胞的增殖。4．结论4．ITGF－pl能够显著抑制大鼠骨髓DC的分化与功能成熟；抑制大鼠骨髓DC的MHC刁类分子与共刺激分子CD86的表达；4．2 TGF－fi；诱导的共刺激分子缺乏的未成熟DC，在体外同种异体混合淋巴细胞反应中能够诱导同种异体T细胞免疫低应答。表明该种DC处于功能未成熟状态，不能引起宿主T细胞的免疫反应，而可能成为诱导移植免疫耐受的重要靶细胞。为开展以未成熟DC为基础的各种免疫治疗研究奠定了良好的基础