论文部分内容阅读
目的观察羟基磷灰石纳米颗粒(HA)介导的N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体2B亚基(NR2B)小干扰RNA(siRNA)鞘内转染后对小鼠福尔马林所致炎性痛的影响以及脊髓背角NR2B蛋白表达的变化,初步探讨羟基磷灰石纳米颗粒作为NR2B-siRNA体内转染载体的可行性。方法采用化学共沉淀-水热合成法制备HA,用琼脂糖凝胶电泳法及紫外分光光度计检测HA对NR2B-siRNA的结合能力和该复合物在生理盐水中的稳定性。选用体重约18-20g的成年雄性昆明种小鼠48只,随机分为六组。第一组(HN组,8只):以HA为载体,将NR2B-siRNA鞘内转染小鼠;第二组(PN组,8只):以聚乙烯亚胺(PEI)为载体,同样的方法将NR2B-siRNA鞘内转染小鼠;第三组(HG组,8只):用HA作载体,将非特异性的绿色荧光蛋白(GFP)的siRNA鞘内转染小鼠,作为NR2B-siRNA的阴性对照;第四组(HA组,8只):鞘内给予小鼠同等容积的灭菌HA混悬液;第五组(NS组,8只):鞘内给予小鼠同等容积的无菌生理盐水;第六组(BC组,8只):只行鞘内穿刺术,不注射任何溶液。术后第7天,各组均经右足底皮下注入1%福尔马林20ul,行为学检测1小时。福尔马林试验后,各组立即取腰段脊髓用于脊髓切片的NR2B免疫组化检测。结果对羟基磷灰石纳米颗粒进行透射电镜分析发现颗粒呈细条状或短棒状,分散较均匀,一维尺寸约40-50nm。在酸性和中性条件下,HA能与NR2B-siRNA以35:1及以上的质量比完全结合,但在碱性条件下与NR2B-siRNA结合能力弱;且HA/NR2B-siRNA复合物在生理盐水重悬液中不会发生解离。对于福尔马林所致的Ⅰ相急性痛,所有组间的急性期伤害性反应无差别(P＞0.05);而与HG组、HA组、NS组和BC组相比,HN组和PN组对于福尔马林所致的Ⅱ相持续痛的伤害性反应显著减少(P＜0.05),HN组和PN组组间差异无统计学意义(P＞0.05),对照组之间差异无显著性(P＞0.05)。脊髓免疫组织化学染色显示,HN组、PN组、HG组、HA组、NS组和BC组各组脊髓背角NR2B阳性细胞数分别为53.79±11.38,60.63±9.9,99.04±16.39,91.42±14.39,101.21±16.82,96.38±10.27。与HG组、HA组、NS组、BC组相比,HN组和PN组脊髓背角NR2B阳性细胞数明显减少(P＜0.05),HN组和PN组组间差异无统计学意义(P＞0.05),对照组之间差异无显著性(P＞0.05)。结论1.作为一种新的siRNA载体,羟基磷灰石纳米颗粒(HA)鞘内注射能有效转染NR2B-siRNA,减少福尔马林致痛小鼠Ⅱ相痛行为;2.HA/NR2B-siRNA复合物鞘内注射后能有效抑制小鼠脊髓背角NR2B的表达。