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目前临床上常用他汀类药物治疗高胆固醇血症患者,其作用机制是通过竞争性抑制,使胆固醇合成关键酶3-羟-3-甲基戊二酸-辅酶A还原酶（HMG-CoA还原酶）活性降低,减少胆固醇合成,达到治疗目的。由于他汀类药物有毒副作用,不宜长期服用,使高胆固醇血症、冠心病的控制变得困难。近10多年,一种从甘蔗腊质或蜂蜜中提取出来具有多个脂肪族伯醇的化合物--多廿醇（Policosanol）被发现,多项动物实验和临床试验都揭示多廿醇具有降低胆固醇和抗血小板的药理作用。由于它是一种比较安全的天然化合物,我们前期的毒理学实验证明其毒性属于无毒级,体内无明显蓄积作用,可长期服用,对高胆固醇血症、冠心病的预防和治疗展示广泛的临床运用前景。目前关于多廿醇的功能在临床上已经得到很好的研究和证实。大量的动物实验和临床试验都揭示多廿醇有着和他汀类相同的降胆固醇作用,能够以更低的剂量获得相同的甚至是更好的降血脂效果。但是,多廿醇降低胆固醇的确切机理尚未有定论。目的本研究采用体外细胞培养实验方法,紫外分光-速率法检测HMG-CoA还原酶活性,从而判断受试物多廿醇对细胞内HMG-CoA还原酶活性的抑制作用,拟探讨多廿醇降胆固醇的作用机制。方法1、为了确定本次实验研究的药物用药剂量,确保实验结果的准确性,对受试药物（多廿醇）,酶活性促进剂（胰岛素）和受试药物溶剂（乙醇）进行细胞毒性试验,以明确这些因素对HepG2细胞生长的直接影响程度。细胞毒性试验采用MTT活性细胞检测法,此外用乳酸脱氢酶漏出率反映对HepG2细胞生长的破坏程度,用台盼兰染色法检测HepG2细胞存活率。2、HMG-CoA还原酶活性测定方法建立是参考紫外分光-速率法,经适当改进,测定还原型辅酶Ⅱ在反应过程中被氧化的量（340nm吸收锋下降率）来反映HMG-CoA还原酶活性。紫外分光-速率法适用于可溶性HMG-CoA还原酶活性测定,本实验对原方法进行改进,增加精密过滤和加凝聚剂高速离心沉降微粒体,消除比色中散射光的影响,使该方法适用于不溶性HMG-CoA还原酶活性测定。3、实验分组及处理以人肝癌细胞株（HepG2）为实验细胞,细胞经过体外培养传代后采用完全随机设计的原则进行分组,为了观察药物和酶促进剂的交互作用,多廿醇和胰岛素采用正交实验分组,多廿醇和胰岛素分组浓度参考MTT试验的结果。分为:对照组、阳性对照组、多廿醇组、胰岛素组、多廿醇（含高、中、低）和胰岛素（含高、中、低）的正交实验交叉浓度组,共17组。为使多廿醇的体外培养和体内生化代谢过程齐同,加入含肝药物代谢酶的S9液共同培养。以上各组细胞在CO2培养箱中37℃培养6小时,培养终止后收获细胞,钙离子梯度离心法分离微粒体,按上述紫外分光-速率法测定所分离到微粒体中的HMG-CoA还原酶活性和整体细胞中的HMG-CoA还原酶活性。结果1、细胞培养6小时后,多廿醇0.5μg/ml、5μg/ml和50μg/ml组MTT试验细胞抑制率分别为8.5%,19.2%和49.5%。胰岛素0.5μg/ml、1μg/ml、5μg/m、25μg/ml和50μg/ml组MTT试验抑制率分别为+0.85%、-3.59%、-8.77%、-17.44%和+11.18%。多廿醇5μg/ml、10μg/ml、20μg/m和50μg/ml组的乳酸脱氢酶漏出分别为52.1 U/L、79.6 U/L、121.7 U/L和178.3 U/L。细胞计数存活率分别为92.2%、88.0%、80.1%和70.9%。由此可确定多廿醇受试浓度设为5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml,胰岛素受试浓度设为5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml。2、采用紫外分光-速率法用岛津UV-1700仪器进行HMG-CoA还原酶活性测定,经过对NADPH扫描图谱分析,不同浓度的NADPH均在340nm波长处展示很好的特征吸收峰,NADPH标准曲线直线浓度范围在0～0.5mmol/L之间,灵敏度为0.002 mmol/L,加标准NADPH 0.2 mM测试回收率大于97%,重现性均数（（?））为0.1986mmol/L,标准差（S）为0.0028mmol/L,变异系数（CV）为1.42%,95%可信区间（0.193mmol/L,0.2041mmol/L）,NADPH在0.2 mM时自然氧化速率为0.0009/min。经过方法改进后,比色液澄清无混悬物,能满足HMG-CoA还原酶活性测定实验要求,克服了放射性标记法数据变异大的缺点。3、多廿醇对HepG2细胞微粒体和整体细胞HMG-CoA还原酶活性测定实验结果显示,与对照组比较,胰岛素在5～20μg/ml范围对HMG-CoA还原酶活性均呈促进作用,而且有浓度依赖关系。对照组比较,多廿醇在5～20μg/ml范围对HMG-CoA还原酶活性均呈抑制作用,也有浓度依赖关系。在正交分组实验中,多廿醇对HMG-CoA还原酶活性的抑制作用与胰岛素的促进作用有互相抵消的趋势,并显示浓度依赖关系。多廿醇对HMG-CoA还原酶活性的抑制作用在HepG2细胞微粒体和HepG2细胞整体细胞实验都呈相同的效应。结论本研究证实在体外细胞培养条件下,多廿醇对HepG2细胞胆固醇合成关键酶HMG-CoA还原酶活性有显著的抑制作用。证明在多廿醇降低胆固醇药理过程中,HMG-CoA还原酶活性抑制可能是一主要的作用途径。