微生物发酵转化黄芩的研究

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本文进行霉菌发酵转化黄芩的实验研究,采用了添加黄芩苷的改良PDA平板筛选菌株,对发酵条件、转化机理和产物提纯与分析等方面进行了研究。该方法具有底物特异性,条件易控,高效灵敏的优点,通过该方法既可获得增效黄芩炮制品,可提取纯品黄芩素,实现了黄芩二次开发和利用。 采用平板显色法筛选得一株产β-葡萄糖醛酸酶的黑曲霉菌株HQ-10,通过HPLC检测黑曲霉HQ-10与中药黄芩的共发酵产物,证实了HQ-10将黄芩苷发酵转化为黄芩素的作用。 发酵优化试验考察了培养基碳源、氮源、无机盐,发酵条件转速、装量、温度、料水比、pH值等多因素对发酵转化黄芩过程的影响作用,并最终得出最适宜发酵条件:料水比1∶10;初始pH自然;温度28-30℃;转速200rpm;时间5-6d,主要成分黄芩苷转化率达94.9%。 发酵产物采用大孔吸附树脂的先进分离技术与复杂系统优化技术、化学提取法相结合,优化得便利简捷的树脂分离纯化工艺,最优化配比为采用天津海光D-101树脂,上柱样pH3.3,上柱速度8BV/h,上柱发酵液浓度1.15mg/g,加盐浓度6.4%,50%乙醇洗脱,洗脱速度5BV/h,洗脱pH5。吸附率达66.15mg/g,洗脱率34.5%,纯化率80%;柱分离得产物纯品,经核磁共振、红外、质谱、紫外等多种仪器检测确定为黄芩素(5,6,7-三羟基黄酮)。 通过抗炎、镇痛等药效试验初步证明发酵样品较未发酵样品有明显提高,P值基本<0.05,提高了药材的利用效率和疾病治疗的增效作用。
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