论文部分内容阅读
[目的]弱视是目前儿童视力低下的主要影响因素,随着眼部健康筛查的普遍化及低龄化,弱视的发病率也逐渐呈现上升趋势,最新研究显示全球部分地区弱视发病率已接近5%。多年来弱视的发病机制在不断完善更新,但仍缺乏快速、有效、安全、稳定的治疗方法。弱视治疗所需时间长、治疗效果差及治疗成功后效果回退等问题严重危害患者个人生理及心理的健康,阻碍患者自身发展,加重家庭及社会的负担。急需在发病机制上有新的进展,发现新的治疗方法改善现状。[方法]（1）本实验共选取46只出生后18天还没有睁眼的树鼩幼崽,随机分为10组:（ⅰ）形觉剥夺性弱视模型组:N1——左眼眼睑缝合2个月,右眼不做处理,5只;N2——左眼眼睑缝合1个月,右眼不做处理,5只;（ⅱ）形觉剥夺性弱视恢复模型组:N3——左眼眼睑缝合1个月后打开,右眼不做处理,双眼正常视物1个月,5只;N4——左眼眼睑缝合1个月后打开,左眼正常视物,同时换缝合右眼眼睑1个月,5只;（ⅲ）形觉剥夺性弱视干预模型组:S1——左眼眼睑缝合1个月后打开,于打开当日和15天后行左眼玻璃体腔注射2ul Neuritin（1ul/ml）,双眼正常视物1个月,3只;S2-左眼眼睑缝合1个月后打开,于打开当日和15天后行左眼玻璃体腔注射2ul Neuritin（1ul/ml）+1ul DAPT（10mM）,双眼正常视物1个月,3只;S3——左眼眼睑缝合1个月后打开,于打开当日和15天后行左眼玻璃体腔注射1ul DAPT（10mM）,双眼正常视物1个月,3只;S4——左眼眼睑缝合1个月后打开,于打开当日和15天后行左眼玻璃体腔注射2ulPBS（1×）,双眼正常视物1个月,3只;（ⅳ）正常对照组:C1——双眼正常视物2个月,5只;C2——双眼正常视物1个月,5只。（2）动物模型制作完成后在对应时间处死,取出左眼,剥离视网膜,一部分制作透射电镜标本及视网膜切片,另一部分提取蛋白及mRNA。（3）对视网膜切片进行HE染色,观察已制作好的电镜标本,并通过Western Blot及实时荧光定量PCR对新鲜视网膜组织内相关因子表达量进行检测。（4）本实验所有数据均采用（x±s）表示,应用SPSS 17.0软件分析,应用两独立样本t检验及单因素方差分析（one-way ANOVA）进行比较,P＜0.05则认为差异明显且有统计学意义。[结果]1.视网膜切片HE染色结果显示:形觉剥夺性弱视树鼩模型中视网膜的视锥视杆细胞、双极细胞、视网膜神经节细胞均存在细胞数量减少、体积缩小、形态不规则等改变,而在恢复过程中细胞数量、体积、形态均有一定程度改善,但无法恢复到正常水平。2.WB和qPCR结果统计学分析:形觉剥夺性树鼩弱视模型N1、N2组中Neuritin的蛋白及mRNA表达量较正常对照组均有一定程度下降,其差异有统计学意义（P＜0.05）,而恢复模型N3、N4组中Neuritin表达量较损伤模型出现升高,其差异有统计学意义（P＜0.05）,但与正常对照组相比仍有差距,其差异有统计学意义（P＜0.05）。形觉剥夺性树鼩弱视模型N1、N2组中Notch-1受体的表达水平相比正常对照组均有下降,差异有统计学意义（P＜0.05）,恢复模型N3组中Notch-1的表达量较损伤模型出现降低,差异有统计学意义（P＜0.05）,N4组相较于损伤模型,Notch-1表达量升高,差异有统计学意义（P＜0.05）,但与正常对照组间无统计学差异（P＞0.05）。3.视网膜透射电镜结果显示:正常对照组C1组视锥细胞、双极细胞、视网膜神经节细胞大小中等,细胞膜完整,内部细胞器未见明显异常。弱视模型组N2组视网膜各层细胞胞膜皱缩,细胞有染色质边集,出现细胞残体。干预组S1组玻璃体注射Neuritin蛋白后,其视锥细胞、双极细胞、视网膜神经节细胞的细胞形态恢复正常,细胞膜较完整,线粒体、内质网、核糖体未见明显异常。其恢复情况相比遮盖优势眼（N4组）及双眼打开自然恢复（S4组）的树鼩更好,S3、S4组注射阻断剂后细胞恢复情况较差。4.玻璃体注射Neuritin蛋白后qPCR结果统计学分析:Neuritin下游信号通路相关因子 NEURL-1、JAG-1、DLL-1、Notch-1、HES-1、HEY-1 表达量在 S1 组和 S3 组间无显著差异（P＞0.05）,S2组中的各个因子表达水平明显高于其他各组,其差异有统计学意义（P＜0.05）。[结论]1.视网膜细胞具有可塑性。形觉剥夺性弱视可导致视网膜视锥视杆细胞、双极细胞、神经节细胞均出现损伤,在恢复过程中可有一定程度改善,但无法恢复到正常水平。2.Neuritin可能通过对Notch信号通路的部分调控参与了形觉剥夺性弱视的形成及恢复。3.使用玻璃体腔内注射Neuritin能够对形觉剥夺性弱视起到治疗作用。4.Neuritin的过表达能够部分下调NEURL-1、Notch-1信号通路配体受体及其下游靶基因HES-1、HEY-1的表达。5.Neuritin对形觉剥夺性弱视的治疗机制可能是Neuritin过表达从而抑制NEURL-1介导的JAG-1、DLL-1蛋白内吞,进而抑制Notch信号通路的传导。