【摘 要】
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金线莲Anoectochilus roxburghii（Wall.）Lindl,为兰科开唇兰属植物,全草入药,是一种重要的民间用药。金线莲苷（Kinsenoside）为金线莲中的主要活性成分,具有显著的降血糖、降血脂和肝保护作用等药理活性。随着金线莲苷相关研究的深入,其价值不断被挖掘,开发金线莲苷相关的药物成为大势所趋。但目前获取金线莲苷原料的唯一来源是从金线莲中提取,其药材价格昂贵,且由于基源的
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金线莲Anoectochilus roxburghii（Wall.）Lindl,为兰科开唇兰属植物,全草入药,是一种重要的民间用药。金线莲苷（Kinsenoside）为金线莲中的主要活性成分,具有显著的降血糖、降血脂和肝保护作用等药理活性。随着金线莲苷相关研究的深入,其价值不断被挖掘,开发金线莲苷相关的药物成为大势所趋。但目前获取金线莲苷原料的唯一来源是从金线莲中提取,其药材价格昂贵,且由于基源的不确定,还会带来手性异构体杂质的干扰,这无疑进一步推高了生产成本。生物合成从理论上来讲具有合成效率高,产物专一性强等优点,逐渐成为近二十年来天然产物研究的热点。为解决金线莲苷原料来源问题,本研究从金线莲苷生物合成途径的入手,对金线莲苷生物合成通路及涉及的合成基因进行初步探讨。本研究首先运用液相色谱-三重四级杆质谱联用（HPLC-QQQ-MS）技术对金线莲中金线莲苷进行含量分析。通过进行方法学考察,建立了灵敏、可靠的LC-MS含量测定方法,并对多个品种金线莲的不同组织、生长时期的金线莲苷进行含量测定,分析金线莲苷在植物中时间和空间上的代谢分布规律,为筛选具有代谢差异的植物样本,进行转录组测序提供参考信息。然后,通过对组培三个月金线莲的根、茎、叶进行三代全长转录组测序和二代表达量转录组测序,运用生物信息分析方法,结合金线莲苷在不同组织中的代谢分布规律,筛选得到12个具有组织差异性表达的候选糖基转移酶基因。为了进一步缩小金线莲苷苷元3-羟基-γ-丁内酯[（R）-3HBL]生物合成候选基因的筛选范围,我们运用13C稳定同位素示踪的方法来研究（R）-3HBL的合成通路,运用LC-q TOF-MS和NMR技术对对饲喂不同13C标记模式的葡萄糖、醋酸钠后的产物进行分析,期望找出其同位素标记规律,推断3HBL的生物合成途径。同时,为了给下一步候选基因功能验证和构建产金线莲苷菌株提供实验工具,我们对文献报道的产[（R）-3HBL]大肠杆菌进行重构,获得工程菌株（EMG3-C）。综上工作的实施,将为金线莲中金线莲苷的生物合成途径的解析、产金线莲苷工程菌株的建立及后续实现金线莲苷异源细胞工厂生产奠定基础。
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