海洋微藻β-葡聚糖的研究

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海洋微藻通过光合作用合成多糖,其中硅藻、金藻和黄藻的光合作用产物是β-葡聚糖,β-葡聚糖是由葡萄糖单糖通过β-糖苷键连接形成的聚合体,具有多种生理活性。本实验在综合考察了多种海洋微藻生理代谢特征的基础上,挑选12种硅藻和6种金藻,观察它们的生长代谢与β-葡聚糖累积的关系,在此基础上选取6种生长代谢快、β-葡聚糖产量高,具有微藻种属代表意义的微藻,提取它们的β-葡聚糖检测其生理活性,为将来进一步的深入研究和生产提供参考。通过跟踪检测在生长周期内海洋微藻单个细胞内β-葡聚糖的含量变化发现,不论是硅藻还是金藻,β-葡聚糖在指数生长期的含量比较低,进入平台期后其含量显著增加,在平台后期或衰亡期含量累积到最大。由此可以推测海洋微藻中β-葡聚糖的最佳采收时期是在平台后期或衰亡期。同时比较了各种微藻单位细胞β-葡聚糖的累积效率发现,不同种类的海洋微藻β-葡聚糖的累积效率有明显差别,显示了不同种类的海洋微藻对β-葡聚糖的生产和代谢利用特征上的差异。微藻的生长代谢状态显著影响细胞内β-葡聚糖的累积。本研究从营养盐代谢的角度切入,观察氮、磷营养盐的缺乏和补充对微藻β-葡聚糖的累积的影响,以期通过营养盐调节方法实现生产过程中的调控。实验发现,向生长至平台期的营养盐限制的微藻中添加氮盐或磷盐,都会导致微藻细胞内β-葡聚糖含量发生变化,经单因素方差分析发现,加磷组的微藻β-葡聚糖含量显著升高,加氮组的微藻β-葡聚糖含量与对照组无显著性差异,可见添加磷盐有利于微藻细胞内β-葡聚糖的积累,添加氮盐对β-葡聚糖的累积没有影响。不同浓度的磷盐对微藻β-葡聚糖累积的影响不同,存在一个β-葡聚糖累积的最适磷源浓度,低于或高于最适浓度时,β-葡聚糖进一步累积作用受限或受抑制,甚至会导致微藻死亡。对海洋微藻β-葡聚糖生物活性检测包括对抗肿瘤活性、抗氧化性、细胞毒和抑菌性这4个方面。实验发现,6种海洋微藻来源的β-葡聚糖作用于小鼠巨噬细胞能诱导抗肿瘤因子(TNF-α)的产生;对稳定的自由基DPPH的清除率较低,在β-葡聚糖浓度为400μg/ml时最高清除率仅为25%,而对羟基自由基的的清除率较高,在β-葡聚糖浓度为400μg/ml时最高清除率达到72.9%;将6种海洋微藻来源的β-葡聚糖作用于子宫癌hela细胞都表现出细胞毒活性,在β-葡聚糖浓度为200μg/ml时hela细胞最高致死率不到50%;将6种海洋微藻来源的β-葡聚糖作用于大肠杆菌和金黄色葡萄球菌,发现β-葡聚糖能够显著抑制大肠杆菌的生长,但是对金黄色葡萄球菌不仅没有抑制作用,反而促进了该细菌的生长,说明不同细菌对β-葡聚糖的反应会有所不同。
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