富纳米硒沼泽红假单胞菌对四氯化碳导致肝损伤小鼠的保护作用研究

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本文采用单因子实验和四因素三水平正交实验,确定了沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)还原亚硒酸钠为红色单质硒的最优条件。在优化实验中,先确定了沼泽红假单胞菌还原亚硒酸钠四个因素(亚硒酸钠浓度、菌种接种量、培养基初始pH值、培养时间)的最佳水平,再选取四因素三水平:亚硒酸钠浓度(lmmol/L、2mmol/L、3mmol/L)、菌种接种量(5%、10%、15%)、培养基初始pH值(5、6、7)、培养时间(6d、7d、8d)进行正交实验,确定了转化的最佳水平。在此基础上,为进一步研究本实验室转化得到的红色单质硒的生物活性,将雄性昆明小鼠随机分为9个组,即空白对照组、富纳米硒沼泽红假单胞菌高剂量对照组(200μg/kg.BW)、三个浓度的富纳米硒沼泽红假单胞菌处理组(50、100、200μg/kg.BW+CCl4)以及三个相应剂量沼泽红假单胞菌处理组,研究富纳米硒沼泽红假单胞菌对小鼠CCl4致急性肝损伤的肝保护效应。小鼠按相应剂量的溶液连续灌胃14d之后,除空白对照组和富纳米硒沼泽红假单胞菌高剂量对照组腹腔注射植物油之外,其余组均一次性腹腔注射1%的CCl4(10mL/Kg.BW),建立急性肝损伤模型。造模24h后取血清,测各项血清酶指标:谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(AKP)、乳酸脱氢酶(LDH);取肝脏和脾脏分别计算肝脏指数和脾脏指数;取肝组织检测肝脏抗氧化酶(SOD、CAT、GPx)活力以及脂质过氧化产物(MDA)水平;采用常规石蜡切片法研究了富纳米硒沼泽红假单胞菌对小鼠肝组织病理结构与功能的影响。旨在验证富纳米硒沼泽红假单胞菌对小鼠肝脏的保护作用。结果显示:1.通过沼泽红假单胞菌将亚硒酸钠还原为红色单质硒条件的优化:对转化率影响较大的因素由高到低依次为:亚硒酸钠浓度>培养时间>培养基初始pH值>菌种接种量;N菌株还原亚硒酸盐得到红色单质硒的最适条件为:亚硒酸钠添加量2.0mmol/L、培养时间8d、培养基初始pH7.0和接种量15%,优化后转化率达到91.36%。2.小鼠体内生理生化实验结果:富纳米硒沼泽红假单胞菌最高剂量对照组与空白对照组基本保持在同一水平,四氯化碳模型组均与空白对照组差异极显著。富纳米硒沼泽红假单胞菌能够明显降低由CCl4诱导的肝损伤引起的小鼠血清中ALT、AST、 AKP、LDH升高;降低肝损伤导致的肝脏指数和脾脏指数增加;提高肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活力,降低肝组织内丙二醛(MDA)含量,且硒剂量越高,保护效果越明显。3.小鼠肝脏组织形态学观察结果显示:富纳米硒沼泽红假单胞菌能够减轻四氯化碳损伤导致的肝脏表面出血点症状;能够明显改善肝损伤小鼠的肝细胞坏死、炎性浸润、气球样变、细胞水肿、核固缩现象,保护效果呈明显剂量效应,最高剂量保护组仅有散在点状坏死,轻微细胞水肿。由以上研究结果得出如下结论:①富纳米硒沼泽红假单胞菌在一定程度上可以减少肝损伤所致血清酶的释放,提高抗氧化酶活力。②能够改善四氯化碳所致肝损伤引起的肝细胞坏死、发炎等症状。③本实验使用的最大剂量富纳米硒沼泽红假单胞菌对小鼠肝脏无毒,且对四氯化碳所致肝损伤小鼠具有保肝作用,其保护机制可能为富纳米硒沼泽红假单胞菌能够清除自由基,抑制脂质过氧化,提高机体抗氧化水平,保护细胞膜、线粒体膜等生物膜的完整性,从而保障细胞正常生理功能。
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