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目的:研究单甲氧基聚乙二醇丙醛(mPEG-ALD,20KD)修饰重组人生长激素(rhGH)的最适反应条件以及修饰产物的纯化方法;并以目标产物——单聚PEO-rhGH为研究对象,对其相对分子量、纯度、等电点、修饰位点、二级结构、分子构象、体外受体亲和力以及体内生物学活性进行了研究。方法:用SDS-PAGE分析不同反应条件对修饰反应产物的影响;用离子交换及分子筛进行分离纯化;通过分子筛高效液相(Size Exclusion HPLC)、毛细管等电聚焦(CIEF)、圆二色谱(CD)、质谱、以及荧光光谱等方法对单聚PEG-rhGH的纯度、等电点、二级结构、相对分子量、修饰位点以及分子构象进行了研究;采用妊娠兔肝细胞膜放射受体分析法(RRA)检测单聚PEG-rhGH的体外受体亲和力;利用未成年去垂体大鼠体重增加法检测单聚PEG-rhGH的体内生物活性。结果:通过筛选,选定pH6.0,rhGH与mPEG-ALD质量比1:8,反应时间16h为最佳修饰条件。在此条件下,单聚PEG-rhGH的比例可达77.8%;经两步分离纯化,目标产物单聚PEG-rhGH的得率达到52.9%。样品在分子筛高效液相图谱上仅出现一个峰,纯度大于98%;CIEF测定单聚PEG-rhGH的等电点为5.2,这与未修饰的rhGH的等电点相一致;质谱扫描法测定结果表明单聚PEG-rhGH的相对分子量为43KD,与理论值基本相符;胰肽图谱表明在修饰过程中聚乙二醇丙醛选择性的与蛋白分子N末端(苯丙氨酸)α氨基相偶连;CD谱与荧光光谱均表明单个mPEG-ALD的修饰对rhGH的二级结构以及分子构象没有明显影响;与未修饰的rhGH相比,单聚PEG-rhGH体外受体亲和力降低了4.97倍;体内活性测定结果表明单聚PEG-rhGH的体内作用时间更长且更加有效。结论:确立了单甲氧基聚乙二醇丙醛修饰重组人生长激素的最适反应条件以及修饰产物的纯化方法。并对单聚