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[目的]:获得L-02耐砷细胞,并研究其耐砷性与MDR1、GST-π表达的关系。
[方法]:采用人肝细胞L-02细胞株,噻唑兰法(MTT)进行24h急性NaAsO2毒性试验,选择细胞生存率在90%-95%时的NaAsO2浓度为诱导浓度,同时设一组不加砷诱导的L-O2细胞作为同步对照。置于细胞培养箱中,37℃,5%CO2常规培养6周,定期换液传代,每周用MTT法计算半数致死浓度(LC50)及细胞的生存率:6周后,将加砷诱导的L-O2肝细胞与同步对照细胞在培养基中培养至细胞80%融合,然后进行24h急性砷毒性试验(NaAsO2终浓度为0μmol/L、2.51μmol/L、5.0μmol/L、10μmol/L、不同浓度NaAsO2分别与50μmol/L,EA、10μmol/L PSC833共同作用);采用real-timePCR检测细胞内MDR1、GST-π mRNA的表达情况;免疫组织化学法(SABC法)检测细胞内P-pg、GST-π蛋白的表达;石墨炉原子吸收光谱法检测各组细胞内总砷浓度。
[结论]:人正常肝细胞L-02与细菌、真菌、哺乳动物及人前列腺细胞一样也有可诱导的对砷的耐受现象,提示临床用药要关注此问题;L-02肝细胞代谢砷与MDR1、GST-π有关,在基因表达和功能蛋白的含量上均有体现。