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聚羟基脂肪酸酯(PHA)是广泛存在于细菌体内的一种高分子聚合物,呈现生物可降解性、生物相容性等优良性能,具有广泛的应用前景。
本文对聚羟基脂肪酸酯(PHA)作为组织工程材料的应用进行了系统的研究,成功开发了植入用细胞支架材料PHBHHx/PHB共混体系,而且为新体系的开发制订了方案并取得了初步成果,主要结果如下:
1.与纯PHB和PHBHHx相比,PHBHHx/PHB共混体系在柔韧性和刚性方面各有增强。当体系中PHBHHx的含量由40%增加到60%时,共混体系的断裂伸长率从15%迅速增大至106%,柔韧性有了极大的改善。差示扫描量热(DSC)的结果说明PHBHHx与PHB完全相容,PHBHHx抑制了PHB的结晶,使共混体系的结晶度和结晶速率下降。
2.PHBHHx/PHB膜的生物相容性简单地依赖于共混体系中PHBHHx的含量;培养96h后L929细胞密度由纯PHB膜上的0.13×104/ml增加到纯PHBHHx膜上的5.69×104/ml,纯PHBHHx膜上的细胞密度是PLA膜上的6.3倍。培养14d后,兔软骨细胞在PHBHHx与PHB比例为2:1和1:2的共混材料支架上的密度分别达到9.2×107/g和8.5×107/g,而此时在纯PHB和PHBHHx支架上的细胞数量仅分别有2.8×107/g和5.3×107/g。共混支架上软骨细胞分泌的丰富的胞外基质(ECM)形成了连续的细胞—基质层,在ECM中发现大量磷酸钙盐—羟基磷灰石(HAp)生成,体现了其正常的生理功能。PHBHHx/PHB共混体系的生物相容性决定于材料的表面形貌,相对平整的表面增强了材料的生物相容性。
3用脂肪酶进行表面处理可以极大增强PHBHHx/PHB体系的生物相容性。经Lipolase100T处理后的PHB膜上细胞数量由0.13×104/ml增加到5.24×104/ml,比未处理的样品增长了40倍;随着共混体系中PHBHHx含量的增加,脂肪酶处理的效果逐渐减弱,
4.对PHA前体合成酶体系的研究表明葡萄糖的添加策略对3HB的合成没有影响;而在细胞生长的对数期加入葡萄糖可使3HA的合成增加6倍。在合成的最开始添加丙烯酸与葡萄糖可以使3HB和3HA的合成量从234mg/L和27mg/L分别增加到662mg/L和135mg/L。如果在12h时添加葡萄糖,则无论何时添加丙烯酸对3HB和3HA的合成都有一定的抑制作用。在研究中还首次发现了丙烯酸对重组大肠杆菌在葡萄糖培养基下的主要副产物乙酸合成的抑制作用。
5采用PCR技术成功地克隆了3个中长链前体合成酶phaG基因。通过序列同源性的比对发现PhaG酶的N端序列远比C端保守,提示N端序列与酶的活性密切相关。