目的:探讨间充质干细胞外泌体对附睾上皮细胞电离辐射损伤的修复作用及其可能的作用机制方法:首先培养人脐带间充质干细胞,通过超速离心法分离间充质干细胞外泌体,利用透射电镜和NTA分析外泌体大小,WB和流式鉴定外泌体特异性标志物的表达。其次,通过分离小鼠附睾上皮细胞,建立小鼠附睾上皮细胞的原代培养方法,并通过测定附睾上皮细胞特异性蛋白GPX-5、上皮细胞特异性蛋白CK-18以及附睾上皮细胞特异性分泌的蛋白唾液酸和α-1,4-糖苷酶进行鉴定;通过不同剂量（0、2、4、6 Gray）辐照附睾上皮细胞,Annexin-V/PI流式方法和CCK-8检测电离辐射后附睾上皮细胞的凋亡及细胞活性情况,WB和免疫荧光检测辐照损伤相关蛋白γ-H2AX表达水平,建立附睾上皮细胞电离辐射损伤模型。最后,在附睾上皮细胞电离辐射损伤中加入间充质干细胞外泌体干预（OGY、OGY+EXO、4GY、4GY+EXO）,以及在同一辐照条件下加入不同浓度间充质外泌体（0、6.25、12.5、25、50、100、200 μg/ml）,检测附睾上皮细胞凋亡及活性情况,检测γ-H2AX和凋亡相关蛋白Cleave-Caspase3、Cleave-PARP表达水平,并通过检测AKT、MAPK和mTOR等信号通路激活情况,以及利用生物合成外泌体内富含的miRNA Let-7g和抑制剂进一步探究间充质干细胞外泌体对附睾电离辐射损伤修复的机制。利用Graphpad 7.0软件对实验数据进行整理和统计学分析,多组数据比较采用单因素方差分析（ANOVNA）和Dunnett’s test比较,两组数据间采用t检验,P<0.05时,认为差异存在统计学上意义。结果:成功分离了人脐带间充质干细胞外泌体,经电镜和NTA分析,大小约30-150nm,WB 鉴定结果显示均表达 CD9、CD63、CD81、Flotilin1、HSP70 等外泌体标志蛋白;建立了稳定的原代附睾上皮细胞培养体系,培养的上皮细胞呈鹅卵石样贴壁生长,经鉴定表达附睾上皮细胞特异性蛋白GPX-5和上皮细胞特异性蛋白CK-18.ELISA结果显示,能够分泌附睾上皮细胞特异性蛋白唾液酸和α-1,4-糖苷酶;电离辐射后,随着辐照剂量的增加,附睾上皮细胞活性明显降低（t=10.47 P<0.001）,凋亡明显增加（t=5.552 P<0.01）,辐照损伤相关蛋白γ-H2AX表达上调;加入外泌体干预后,细胞活性提高（t=45.39 P<0.0001）,凋亡受抑制,凋亡比例明显降低（t=5.776 P<0.001）,且外泌体的作用具有浓度依赖,随着外泌体浓度的增加,细胞活性逐渐提高,当外泌体浓度大于25μg/ml时,具有统计学差异（P<0.05）;辐射后γ-H2AX、P-AKT、Cleave-Caspase3、Cleave-PARP表达明显上调,加入外泌体干预后,γ-H2AX、P-AKT、Cleave-Caspase3、Cleave-PARP 表达明显下调。MAPK 和 mTOR 表达无明显变化;加入miRNA Let-7g mimc以后,辐射损伤相关蛋白γ-H2AX表达下调,而Let-7g miRNA抑制剂减弱外泌体对辐射损伤的修复作用。结论电离辐射可诱导附睾上皮细胞凋亡、降低附睾上皮细胞活性;间充质干细胞外泌体可以抑制电离辐射导致的附睾上皮细胞细胞凋亡,提高细胞活性,促进电离辐射损伤修复;MSC外泌体可通过携带的miRNA Let-7g激活AKT信号通路调控γ-H2AX的表达来促进附睾上皮细胞辐射损伤修复。