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舌鳞状细胞癌(tongue squamous cell carcinoma, TSCC)是口腔颌面部最常见的恶性肿瘤之一。一方面,由于舌体特殊的位置和其所担任的重要功能,一旦其结构受损或者发生功能障碍,将给患者的生活质量带来极大的挑战,甚至危及生命；另一方面,TSCC发病机制尚不明确,起病隐匿,恶性程度高,淋巴转移率高,且易复发,给临床诊断和治疗带来了巨大的挑战。近年来钾通道(potassium channel)尤其是电压门控型钾通道(voltage-gated K+ channels, Kv)受到越来越多肿瘤方面研究学者的关注。Kv广泛存在于兴奋性和非兴奋性细胞的细胞膜上,且参与了多种细胞的生理功能,对多种细胞的增殖、周期以及凋亡都有一定的影响。4-氨基吡啶(4-aminopyridine,4-AP)是一类电压门控型钾通道阻滞剂,可以选择性的阻断Kv通道。多项研究表明,4-AP可以抑制多种肿瘤细胞的增殖,诱导细胞凋亡,并参与细胞周期的调控。目的：本实验通过CCK-8法(Cell Counting Kit,细胞计数试剂盒)检测4-AP对人舌鳞癌细胞株Tca8113细胞增殖的影响,流式细胞术(Flow cytometry, FCM)检测4-AP对人舌鳞癌细胞周期的调控及细胞凋亡率的检测,旨在探讨4-AP对人舌鳞癌Tca8113细胞生长、周期及凋亡的影响,明确4-AP是否能抑制人舌鳞癌细胞的生长,是否能促进该细胞的凋亡,以期为4-AP可能应用于人舌鳞癌的预防、诊断和治疗提供可靠的理论依据。方法：1.采用CCK-8法检测4-AP对人舌鳞癌Tca8113细胞增殖的影响：浓度为1、5、10、20、50、100mmol/L的钾离子通道阻滞剂4-AP分别作用于人舌鳞癌Tca8113细胞12h、24h、48h后,酶标仪检测各组细胞的OD值,计算各浓度4-AP在不同时间对该细胞的增殖抑制率,同时在倒置相差显微镜下观察细胞形态学的改变；2.流式细胞术检测4-AP对人舌鳞癌Tca8113细胞周期的影响：浓度为5、10、20.50mmol/L的4-AP干预人舌鳞癌Tca8113细胞24h后,70%酒精固定细胞12h,碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)染色,流式细胞仪检测各组细胞周期；3.流式细胞术检测4-AP对人舌鳞癌Tca8113细胞凋亡的影响：浓度为5、10、20、50、100mmol/L的4-AP作用于人舌鳞癌细胞24h后,Annexin V-FITC和PI双染,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率；4.所有资料采用SPSS19.0软件进行数据分析,所有实验数据用(x±S)表示,各组间比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA),P<0.05表示差异具有统计学意义。结果：1.倒置相差显微镜下观察可见,随着4-AP的浓度和干预时间的增加,Tca8113逐渐出现细胞体积减小,细胞固缩变圆,细胞染色质凝集,细胞内出现较多空泡等一系列细胞形态的改变。2.4-AP对人舌鳞癌Tca8113细胞的增殖有抑制作用,采用单因素方差分析显示,当浓度分别为1、5、10、20、50、100mmol/L的4-AP干预Tca8113细胞12h后,细胞的增殖抑制率分别为0.65%、1.48%、2.98%、6.43%、23.57%和47.26%,差异具有显著性(P<0.01)；当干预细胞24h后,细胞增殖抑制率分别为0.76%、8.40%、10.64%、13.30%、36.95%和74.50%,差异具有显著性(P<0.01)；而当药物干预达到48h后,细胞增殖抑制率则分别为1.01%、6.69%、30.16%、72.45%、79.33%和80.15%,差异具有显著性(P<0.01)。对不同作用时间同一浓度4-AP干预的各组Tca8113细胞增殖抑制率做统计学分析,结果显示浓度为1mmol/L的实验组在4-AP干预人舌鳞癌Tca8113细胞12h、24h和48h后,细胞的增殖抑制率分别为0.65%、0.76%和1.01%,组间比较P>0.05,差异无统计学意义；其余浓度为5、10、20、50、100mmol/L实验组组间比较,均P<0.01,具有显著性差异。3.浓度为5、10、20、50mmol/L的4-AP作用于人舌鳞癌Tca8113细胞24h后,G0/Gl期的细胞所占的比例由对照组的49.60%上升至71.73%,具有显著性差异(P<0.01)；S期细胞所占的比例由对照组的40.97%降至’17.03%,具有显著性差异(P<0.01)；G2/M的细胞比例对照组为9.43%,实验组分别为10.63%、10.97%、12.27%和10.97%,差异无统计学意义(P>0.05),以上结果提示4-AP阻滞Tca8113细胞于G0/G1期。4.流式细胞仪检测浓度为5、10、20、50、100mmol/L的4-AP作用于人舌鳞癌Tca8113细胞24h后细胞凋亡率,结果显示浓度为5、10、20、50mmol/L4-AP组细胞凋亡率分别为6.79%、6.34%、7.28%和7.39%,与对照组的7.08%相比较,差异无统计学意义(P>0.05)；浓度为100mmol/L组镜下可见大量漂浮细胞,仅存极少数贴壁细胞,细胞浓缩呈圆形,可见较多细胞碎片,流式细胞仪检测其凋亡率为35.01%,明显高于其他实验组,具有显著性差异(P<0.01)。结论：1.4-AP对人舌鳞癌Tca8113细胞的增殖有显著抑制作用,这种作用呈时间浓度依赖关系。2.4-AP能有效调节人舌鳞癌Tca8113细胞周期,阻滞细胞于Go/G1期。3.4-AP能够诱导或促进人舌鳞癌Tca8113细胞发生凋亡。