论文部分内容阅读
本论文以我国资源丰富而又急待开发的葵花籽粕为研究对象,对葵花籽粕资源的综合利用进行了较为系统的研究。主要研究了葵花籽粕蛋白的分离和其中富含的活性物质绿原酸的分离纯化工艺,为综合利用葵花籽粕资源打下了基础。
首先建立了测定葵花籽粕中绿原酸的高效液相色谱方法。采用此方法,绿原酸可以得到较好的分离。该方法简便、快速、准确、重现性好,适用于葵花籽粕中绿原酸的准确测定。
然后较为系统地研究了从葵花籽粕中提取绿原酸和蛋白质的工艺。考察了乙醇浓度、温度、料液比、提取时间等因素对绿原酸提取率的影响,得到了绿原酸提取工艺的最佳参数:乙醇浓度50%、温度60℃、提取2次、每次的料液比1:12(W/V)和时间2h。在此条件下,绿原酸的提取率为86.92%。同时还研究了从提取绿原酸后的葵花籽粕中提取蛋白质的影响因素,确定了提取蛋白质的最佳工艺条件:NaCl浓度1mol/L、温度50℃、料液比1:10(W/V)、控制时间1~1.5h和pH7~9。此时,蛋白质的提取率为38.58%。
接着采用有机溶剂萃取法对绿原酸进行分离纯化。确定了乙酸乙酯作为绿原酸的萃取剂,同时考察了影响萃取效果的因素,得到了最佳萃取条件:原料液中绿原酸浓度100mg/mL左右、pH2.0、分3次萃取、每次3min左右、每次乙酸乙酯与原料液的体积比为2∶1。在此条件下,可得到黄色晶状体绿原酸产品,其纯度为55.82%,得率为67.15%。
在此基础上,研究了大孔吸附树脂对绿原酸的分离纯化效果。从14种大孔吸附树脂中筛选出对绿原酸分离纯化效果较为理想的DM301树脂,考察了影响其对绿原酸分离纯化效果的因素,确定了最佳吸附和解吸条件:进样液浓度19.28mg/mL左右、pH2.0、吸附流速2mL/min、最佳洗脱剂为40%乙醇、洗脱流速2mL/min。在此条件下,可得到乳白色晶状体绿原酸产品,其纯度为90.24%,得率为57.26%。
最后研究了绿原酸产品的生物活性。绿原酸清除DPPH自由基的IC50为15.58μg/mL,对DPPH自由基的清除能力优于BHT和Vc。接着绿原酸抑制亚油酸自氧化研究表明,浓度为100μg/mL的绿原酸对亚油酸自氧化作用的抑制率可达到60.18%;在浓度均为50μg/mL条件下,绿原酸对亚油酸自氧化的抑制效果优于Vc。最后,考察了绿原酸的抗肿瘤活性。通过对黑色素瘤细胞B16和乳腺癌细胞MCF-7两种细胞培养实验发现,绿原酸抑制这两种细胞增长的作用强弱呈现剂量依赖性;小鼠模型也表明绿原酸能显著抑制B16黑色素瘤细胞的增长。