【摘 要】
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目的:建立从肿瘤细胞中分离纯化热休克蛋白70(HSP70)多肽复合物的方法,探讨其负载树突状细胞(dendritic cells,DC)在体外的抗肿瘤作用。 方法:热处理人胃癌细胞SGC,制备细胞裂
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目的:建立从肿瘤细胞中分离纯化热休克蛋白70(HSP70)多肽复合物的方法,探讨其负载树突状细胞(dendritic cells,DC)在体外的抗肿瘤作用。 方法:热处理人胃癌细胞SGC,制备细胞裂解液,用肝素-Sepharose柱、DEAE-Scpharosc柱和ADP-Agarose柱进行序贯分离,所得的蛋白行聚丙烯酰胺凝胶电泳及Westernblot鉴定分析。Bradford法测定蛋白的得率。联合应用粒/巨细胞集落刺激因子(GM-CSF)及白介素-4(IL-4)从外周血单个核细胞中培养DC,用提纯的HSP70多肽复合物负载DC,流式细胞仪检测负载前后DC表型的变化,用HSP70多肽复合物负载的DC诱导淋巴细胞产生免疫活性细胞,用MTT法检测淋巴细胞的增值及免疫活性细胞对SGC、BGC和CW-2的杀伤作用。 结果:纯化的蛋白经鉴定确为相对分子量72KD的HSP70多肽复合物,从1克湿重细胞中可获取56.36ug的HSP70多肽复合物。利用GM-CSF及IL-4可从外周血单个核细胞中获取DC,HSP70多肽复合物可促进DC的成熟,表现为DC表面分子HLA-DR、CD83、CD86表达升高。出SGC中提纯HSP70多肽复合物负载DC激活淋巴细胞产生免疫活性细胞,仅对SGC有特异性的杀伤作用,面对BGC和CW-2无特异性的杀伤作用。 结论:用上述蛋白层析法可分离出高纯度,保留肿瘤抗原信息的HSP70多肽复合物:体外经细胞因子诱导获取的DC经HSP70多肽复合物负载后,在体外可激活淋巴细胞,产生对该肿瘤细胞的特异性杀伤作用。
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