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第一部分小鼠原代肝细胞的分离与培养目的：肝脏是脂质代谢的重要器官，建立小鼠原代肝细胞的体外培养技术，用于后续脂代谢研究。方法：采用IV型胶原酶原位二步灌流法分离小鼠原代肝细胞。用台盼蓝试剂对新鲜分离的细胞进行染色以检测细胞活率，并在不同时间点观察细胞贴壁情况和培养基中白蛋白的分泌情况。通过对肝细胞白蛋白进行免疫细胞化学染色和糖原染色，完成对肝细胞的鉴定。结果：台盼蓝结果显示:本法所制得的小鼠原代肝细胞活率最高可达90%。刚分离的肝细胞大多数呈单个球形，具有一定立体感。4小时后肝细胞已基本贴壁，可见肝细胞的典型的双核结构，胞质呈扁平状。1天后双核更加明显，核仁清晰可见，胞质贴壁更加扁平，2天后细胞成多边形，并维持此形态数天。免疫细胞化学染色和糖原染色显示，所培养细胞基本均可合成白蛋白和糖原，并且一周以内都可以在培养基中检测到细胞分泌的白蛋白。结论：小鼠原代肝细胞的分离与培养技术建立成功，在一周内具有较好的形态和功能，可进行后续实验。第二部分炎症因子对小鼠原代肝细胞脂质积聚及损伤的影响目的：近年来的研究发现，慢性系统性炎症在代谢性疾病的发生和发展中有十分重要的作用。我们通过建立原代肝细胞分离与培养技术，在体外模拟肝细胞正常生理状态，探讨炎症因子是否能造成小鼠原代肝细胞脂质的聚集及损害。方法：将培养的小鼠原代肝细胞分为以下6个组: Control组、软脂酸组（PA）组、炎症因子TNF-α组和IL-6组、PA+TNF-α组和PA+IL-6组。定量检测细胞内甘油三酯和游离脂肪酸水平及油红O染色法来观察各组细胞的脂质沉积情况。荧光定量PCR法检测内质网应激指标IRE1, ATF6, GRP78水平。通过测定过氧化氢以及活性氧水平来检测细胞的氧化应激状态。结果：给予炎症因子TNF-α或IL-6炎症刺激后，小鼠原代肝细胞的甘油三酯的含量出现了明显升高；即使在高脂肪酸背景下，炎症因子同样也能刺激脂肪酸和甘油三酯的含量。这与肝细胞的油红O染色结果一致。进一步检测发现，内质网应激指标IRE1,ATF6, GRP78的基因表达水平以及氧化应激指标ROS和H2O2水平与脂肪酸和甘油三酯含量变化趋势基本一致。结论：炎症因子可使脂质在小鼠原代肝细胞内异常积聚，进而还可引起氧化应激和内质网应激而使肝细胞受损。第三部分炎症因子对SREBP-1及其下游靶基因表达的影响目的：SREBP-1是一种在肝脏中含量丰富的核转录因子，主要通过调控下游靶基因ACCα和FAS的表达，进而调节脂肪酸的合成，影响肝脏内甘油三酯的含量。本研究旨在探讨炎症因子对SREBP-1、ACCα和FAS表达的影响。方法：按第二部分的方法对原代肝细胞进行分组。采用荧光定量PCR法检测炎症因子对小鼠原代肝细胞中SREBP-1、ACCα和FAS基因水平变化，同时采用蛋白免疫印迹（Western Blotting）的方法观察炎症因子对小鼠原代细胞中SREBP-1、ACCα和FAS蛋白表达情况。结果：给予炎症因子TNF-α或IL-6炎症刺激后，小鼠原代肝细胞的SREBP-1，FAS和ACCα的基因和蛋白表达出现了明显升高；即使在高脂肪酸背景下，炎症因子同样也能刺激SREBP-1，FAS和ACCα的基因和蛋白表达。结论：炎症因子可以刺激SREBP-1、ACCα和FAS的表达增加。