研究目的 肺部疾病相关的肺动脉高压是一类肺动脉相关继发性疾病,表现为肺实质与肺间质发生不可逆的病变,而肺移植则是晚期患者治疗的主要方案。但是由于供体缺少,大多数患者无法得到配型符合的健康肺。人胚胎干细胞（hESCs）具有多能性,利用hESCs分化得到肺细胞有望成为可移植的种子细胞。DNA结合抑制因子-2（ID2）作为一种分化抑制因子,具有调控肺分化发育的功能,在器官发生及支气管分支等早期阶段有重要作用。但ID2如何影响在肺发育的早期阶段特别是肺实质中肺芽的形成,以及如何影响肺间质发育过程中内皮细胞（ECs）形成肺血管的机制尚未明确。本研究旨在希望阐明ID2在肺早期发育的作用机制。研究方法 首先建立hESCs定向诱导分化为肺芽类器官和内皮细胞的方法;其次,将hESCs通过CRISPR/Cas9系统和慢病毒感染技术构建得到ID2敲除系和ID2诱导过表达系。将hESCs和ID2基因编辑的细胞系定向分化为肺芽类器官和内皮细胞。通过流式细胞测量术检测分化效率,荧光定量PCR检测相关基因mRNA表达变化,免疫荧光鉴定分化细胞的表面特征分子,蛋白质印迹法检测相关基因蛋白表达变化。最后,通过肺芽类器官与内皮细胞3D共培养检测内皮细胞成管能力差异来比较不同来源的肺芽类器官对内皮细胞成管功能的影响。研究结果 正常hESCs、ID2特异敲除系和ID2过表达系的多能性基因表达无差异。在肺芽类器官分化,ID2促进各个阶段内胚层和肺芽类器官的生成。在内皮细胞分化中ID2能够促进细胞分化进入中胚层;但ID2的缺失能够相对促进内皮细胞的生成,同时也会导致生成的内皮细胞成管功能受损。类器官培养的肺芽能够促进肺血管内皮细胞的成管功能,而ID2的缺陷使这种促进作用有所减弱。研究结论 1.ID2缺失会生成过量的成管功能缺陷的内皮细胞。2.ID2能够促进肺的早期发育和肺芽对肺血管形成的调控作用。