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目的:研究AngII诱导肾小球系膜细胞(GMC)的增殖机制,探讨小窝在GMC增殖中的信号转导作用及小窝、Caveolin-1、P-ERK1/2(活化的ERK1/2)、TRPC6在AngII诱导GMC增殖中的作用。 方法:实验分为:空白对照组(Con组)、AngII刺激组(AngII组)、PD98059(P-ERK1/2抑制剂)预处理组(PD98059组)、MβCD(小窝结构破坏剂)预处理组(MβCD组)。根据预实验选定AngII10-7mol/L作用GMC24h作为细胞的增殖模型(AngII组)。PD98059组及MβCD组分别用PD9805950uM及MβCD10mM预处理GMC1h后,用10-7mol/LAngII刺激24h。四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测GMC增殖。免疫荧光检测Caveolin-1、P-ERK1/2、TRPC6的定位。实时荧光定量PCR检测Caveolin-1、TRPC6mRNA的表达。Western Blot检测Caveolin-1、P-ERK1/2、TRPC6蛋白表达。 结果:(1)AngII组可以明显促进GMC的增殖(P<0.05),而PD98059组及MβCD组,明显抑制AngII对GMC的增殖作用,抑制率达到31.06％(P<0.01)及48.96%(P<0.01)。 (2)GMCOD值与TRPC6蛋白表达水平呈正相关(R=0.907,P<0.01)。 (3)AngII对P-ERK1/2影响:AngII刺激GMCP-ERK1/2升高,15分钟达到峰值(P<0.01),随后降低接近基础水平。PD98059组及MβCD组均可明显降低P-ERK1/2水平(P<0.01)。 (4)AngII对Caveolin-1mRNA及蛋白的影响:AngII刺激GMC,Caveolin-1mRNA水平升高,8h后开始降低;而蛋白先下降,4h蛋白水平降到最低,后升高接近基础水平。 (5)AngII组P-ERK1/2、TRPC6蛋白水平均较Con组明显升高(P<0.01),Caveolin-1蛋白较Con组降低(P<0.01)。PD98059组明显降低P-ERK1/2及TRPC6的蛋白水平,升高Caveolin-1蛋白。MβCD组降低P-ERK1/2及TRPC6蛋白表达,对Caveolin-1蛋白没有明显作用(P>0.05)。TRPC6mRNA与TRPC6蛋白趋势一致(P<0.05)。 结论:(1)MβCD通过破坏小窝结构,降低P-ERK1/2及TRPC6表达,抑制GMC增殖,说明AngII促进GMC增殖、ERK1/2活化及TRPC6表达均需要小窝结构的完整性。 (2)TRPC6与肾小球系膜细胞增殖密切相关。 (3)PD98059通过抑制P-ERK1/2,下调TRPC6,抑制AngII诱导的GMC增殖,提示P-ERK1/2是TRPC6的上游信号分子。 (4)P-ERK1/2与Caveolin-1相互制约,通过调节下游TRPC6,对GMC增殖起正、负调控作用。