黄芩Scutellaria baicalensis Georgi是我国著名的传统中药,临床应用广泛。黄芩苷(Baicalin,BA)是中药黄芩中含量最高的黄酮类化合物,也是黄芩中最主要的有效成分和质控指标成分。研究表明,黄芩苷具有多种生物活性,除了镇静、降压、清除自由基、抗心律失常的作用外,还具有抗炎,抗病毒,抗癌,抗系统性恶性肿瘤等广泛的药理作用。ELISA法是近年来中药有效成分分析技术的新热点。通过制备针对中药成分的特异性单克隆抗体可以建立起简单、快速的中药免疫分析法。与传统分析方法HPLC或HPLC-MS等不同,ELISA方法不需复杂的样品前处理,检测灵敏度和特异性高,还具有经济、无污染、无需大型仪器设备等优点,在对中药复杂成分体系中的有效成分进行分析方面具有独到优势。然而,针对黄芩苷的免疫分析法目前报道很少。由于建立免疫分析方法的核心是制备待检测物质的单克隆抗体,本实验从黄芩苷人工抗原的合成开始,制备了抗黄芩苷特异性单克隆抗体。以此为基础建立了黄芩苷特异性的间接竞争ELISA法,并应用该法进行中药制剂中黄芩苷含量检测。同时,首次应用ELISA法研究中药复方中黄芩苷的体内代谢情况以及黄芩苷的小鼠透皮吸收情况(可以此为基础探讨中药剂型的改造)。具体而言：根据黄芩苷的分子结构特征和理化特性,以牛血清白蛋白(BSA)和多聚赖氨酸(PLL)为载体蛋白,选用碳二亚胺法和高碘酸钠法两种合成方法,分别设计七种合成方案进行黄芩苷人工抗原合成,以优化黄芩苷人工抗原合成条件。合成物(免疫原BA-BSA、包被原BA-PLL)分别经紫外扫描法和薄层色谱法鉴定是否偶联成功。选取合适的免疫原BA-BSA用于免疫Balb/c小鼠。Balb/c小鼠经多次免疫后体内产生抗体。待检测出小鼠血清中抗体达一定效价后,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0在PEG介导下融合。利用有限稀释法筛选出特异性分泌黄芩苷单克隆抗体(anti-BA MAb)的杂交瘤细胞系,并诱导制备腹水抗体(命名为BA1H7)。以间接ELISA法和间接竞争ELISA法对抗体进行鉴定。结果显示,免疫小鼠腹水的单抗效价远大于128000,单抗BA1H7的灵敏度为98ng/ml,且对黄芩素、芦丁等9种结构类似物均显示极低的交叉反应(<0.1%)。以制备出的抗黄芩苷特异性单克隆抗体为基础,选择单抗最佳工作浓度,建立黄芩苷间接竞争ELISA检测法,该方法线性范围为2.66ng/mL～1029.00ng/mL,最低组内和组间差异均不超过3.31%,回收率平均为100.9%,检测工作时间可控制在4h内。对样品精制清开灵注射液中黄芩苷含量的检测结果与HPLC一致。另外,所建立的ELISA法可72h连续检测到灌服半夏泻心汤(颗粒剂和水煎剂)后不同时间点小鼠血中黄芩苷的代谢情况。而且,该法可灵敏的检测黄芩苷透皮给药后的吸收情况,经计算,黄芩苷的Higuchi方程为Q=5.786X-2.043,透皮速率常数为5.786μg·cm2·h1/2。实验结果表明,已成功制备出高效价高灵敏度的黄芩苷特异性抗体,并在此基础上建立了黄芩苷特异性酶联免疫快速检测方法(ELISA)。由于该法在检测上具有独到优势,即检测灵敏度高(可达ng/mL级别)、检测时间短(4h内完成)、样品前处理简单(样品稀释后直接可用)以及对检测样品量要求低(检测只需50ul/孔)等特点,该法在对中药材/中药制剂的质量检测、中药复方有效物质基础的研究以及中药剂型的改造等方面具有很好的应用前景。