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目的: 1.观察生血灵治疗免疫性血小板减少症（immune thrombocytopenia，ITP）脾肾亏虚、火热伤络型患者的临床疗效。 2.研究ITP患者外周血中CD19+CD24hiCD38hiB细胞(调节性B细胞，Breg)的表达水平、功能特点及临床意义。 3.探讨生血灵对ITP患者Breg表达水平、功能影响及其免疫学作用机制。 方法: 1.采用随机对照研究方法，选取脾肾亏虚、火热伤络型ITP患者60例，随机分为2组，分别以生血灵和强的松治疗，观察比较两组治疗前后血小板计数、西医临床疗效、中医证候疗效、止血疗效及毒副反应。 2.以CD19+CD24hiCD38hi作为Breg标记，流式细胞仪检测30例ITP患者（生血灵治疗前后）及10例健康人外周血中Breg占CD19+B细胞的比例。 3.MACS分选30例ITP患者（治疗前后）和10例健康人外周血Breg，Q-PCR法检测Breg分泌的细胞因子白细胞介素-10(IL-10) mRNA和转化生长因子-β(TGF-β)mRNA的表达水平。 4.MACS分选含有Breg及除外Breg的PBMC分别置于预先包被抗CD3/CD28抗体的24孔板培养72h，ELISA法检测IFN-γ和TNF-α，通过Breg抑制IFN-γ和TNF-α等的表达来反映Breg在ITP中的功能及生血灵对其功能的影响。 5.流式微球术检测治疗前后ITP患者及健康人血小板特异性抗体水平，以反映自身反应性B细胞功能变化、Breg对自身反应性B细胞的调节与抑制作用及中药干预后的变化。 结果: 1.治疗组和对照组ITP患者治疗后血小板计数(BPC)均较治疗前有明显提高，有统计学意义（均P＜0.01），两组间比较，生血灵治疗组治疗后的BPC明显高于强的松对照组(P＜0.01);生血灵治疗3个月后，治疗组总有效率90％明显高于强的松组56.7％（P＜0.01）;生血灵治疗组治疗后中医证候多有明显改善，总痊愈显效有效率86.67％明显高于强的松对照组50％（P＜0.01）;两组经治疗后出血评分均较治疗前明显降低，两组比较差异无统计学意义(P＞0.05);中药治疗组仅5例出现胃脘部不适等轻微不良反应，而强的松组有18例出现明显水肿、失眠、面色潮红、心悸等不良反应，有统计学差异(P＜0.01)。 2.治疗前ITP患者Breg的表达率明显低于健康组（P＜0.01）;经过生血灵治疗后ITP患者Breg表达率明显高于治疗前(P＜0.01)，但仍低于健康组(P＜0.01)，经分层分析，治疗后取得完全反应的ITP患者外周血调节性B细胞的表达率与健康组相当，无统计学差异（P＞0.05）。 3.治疗前ITP患者Breg分泌的IL-10mRNA、TGF-βmRNA表达水平均明显低于健康组(P＜0.01);经生血灵治疗后ITP患者IL-10mRNA表达比治疗前明显提高(P＜0.01)，且与健康对照组比较无统计学差异（P＞0.05）;治疗后ITP患者TGF-βmRNA表达率较治疗前明显提高（P＜0.01），但仍低于健康对照组(P＜0.01)。 4.生血灵治疗前ITP患者含Breg组IFN-γ表达与不含Breg组接近，无统计学差异(P＞0.05)，健康对照含Breg组IFN-γ表达则明显低于不含Breg组(P＜0.01)，而ITP患者含Breg组IFN-γ表达也明显高于健康组(P＜0.01);经生血灵治疗后，ITP患者含Breg组的IFN-γ表达较治疗前明显下降(P＜0.01)，其表达也比不含Breg组明显降低，有统计学差异(P＜0.01)，但仍高于健康对照组(P＜0.05);生血灵治疗前ITP患者含Breg组TNF-α表达比不含Breg组明显降低(P＜0.01)，但比健康对照含Breg组表达明显增高(P＜0.01)，经治疗后ITP患者含Breg组TNF-α表达较治疗前明显降低（P＜0.01），并接近健康对照组(P＞0.05)。 5.将各组流式微球术检测后的平均荧光强度值与阴性对照进行比较，计算比率，在ITP组该比率均值为3.34±0.7，明显高于健康对照组(0.99±0.06)，两组荧光强度比率存在显著差异(P＜0.01)，经生血灵治疗后比率均值为1.87±0.25，与治疗前比较有明显差异(P＜0.01)，但仍明显高于健康组(P＜0.01）。 结论: 生血灵治疗ITP疗效良好，其西医疾病疗效、中医证候疗效均优于强的松对照组，生血灵可明显改善ITP患者的出血症状，与强的松作用相似，而毒副反应明显低于强的松;ITP患者外周血调节性B细胞表达减少，功能存在缺陷，不能有效抑制Th1细胞分泌的致病性细胞因子和自身反应性B细胞分泌抗体，其自身反应性B细胞和调节性B细胞存在失衡，导致机体免疫耐受被破坏;生血灵治疗ITP可促进外周血Breg表达，提高Breg数量、改善Breg功能，从而恢复自身反应性B细胞/Breg平衡，体现了中医学“燮理阴阳”，恢复机体“阴平阳秘”的中医学优势特色。