K、CL离子通道阻滞对体外培养兔关节软骨细胞基质合成代谢的影响

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目的:探讨阻断体外培养兔关节软骨细胞膜上的K、CL离子通道对其糖胺多糖(glycosaminoglycan, GAG)、Ⅱ型胶原基质合成代谢的影响。方法:2月龄新西兰白兔,无菌条件下切取双膝关节软骨,酶解法分离软骨细胞,以5×104/孔接种于24孔板中。正常培养2天细胞贴壁后换液,并以12个孔为一组随机分为三组,对照组:用DMEM/F12正常培养;K离子通道阻滞组(简称4-AP组):利用含lmmol/L4-氨基吡啶(4-aminopyridine,4-AP)的DMEM/F12培养,特异性阻断电压门控型K离子通道;CL离子通道阻滞组(简称SITS组):利用含lmmol/L 4-乙酰氨基-4‘-异硫氰基-2,2’-乙拌磷酸均二苯乙烯(4-acetamido-4’-isothiocyano-2,2’-disulfonic acid stilbene, SITS)的DMEM/F12培养,阻断阴离子通道,主要是CL离子通道。分别在换液后第3、6、9天留取各孔上清液并分为两份,一份以阿尔新蓝法检测其GAG的含量,同时另一份以ELISA法检测Ⅱ型胶原的含量(n=12)。结果:与对照组比较,4-AP组在第3天时GAG含量明显下降(P<0.05),但第6天和9天并无显著差别(p>0.05),同时Ⅱ型胶原在第3天和6天含量显著增加(P<0.05),第9天时有下降趋势,但统计学检验无明显差异;SITS组在第3、6、9天GAG含量都显著增加(P<0.05),同时Ⅱ型胶原在第3天和6天含量显著增加(P<0.05),第9天仍然有增加的趋势,但统计学检验无明显差异。结论:阻断K、CL离子通道后显著促进软骨细胞GAG、Ⅱ型胶原的合成,尤其是阻断CL离子通道后,GAG的合成增加尤为明显。
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