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热休克蛋白（Heat Shock Proteins, HSPs）在很多肿瘤组织和细胞中呈高水平表达,并且与肿瘤的发生发展和不良预后相关。HSPs作为分子伴侣通过自身基因的异常表达,调控着肿瘤细胞中众多关键蛋白性质及功能的改变。HSP70（HSP1A1）是热休克蛋白DnaK/HSP70家族的一员（HSP701A1,72KDa） (NM005435。HSP70具有极其微弱的内在的ATPase活性,HSP40 N端的J结构域可以增加HSP70的ATPase活性,对于HSP70与目标底物的紧密结合十分重要,因此,HSP40一般作为HSP70的共伴侣分子一同发挥作用。MRJ （mammalian related DNA J）是DnaJ/HSP40家族成员6（DnaJB6）（NM005494）,是DNA J在哺乳动物中的同源类似物。尿激酶型纤溶酶原激活物受体（uPAR）属于Ly-6（淋巴细胞抗原6）家族,是一个多功能受体,调控细胞外基质降解和肿瘤细胞的生长、黏附和迁移。uPAR和HSP70&MRJ都和肿瘤的发生发展相关。MRJ和uPAR相互作用并调控uPAR介导的细胞黏附。前期实验通过co-IP实验证明了HSP70&MRJ和uPAR存在于一个蛋白复合体中,并且干扰HSP70和／或MRJ下调uPAR介导的HEK 293-uPAR细胞到细胞外基质蛋白vitronectin的黏附。本课题利用免疫荧光实验进一步发现HSP70和uPAR在细胞膜和细胞质中均有共定位现象。干扰HSP70和／或MRJ可以降低细胞表面的uPAR表达。MTT和流式细胞术检测表明HSP70和MRJ干扰后对uPAR介导的细胞增殖和周期均无显著影响。Transwell实验和伤口愈合实验表明,干扰HSP70和／或MRJ可通过调控uPAR降低肿瘤细胞的迁移能力,并下调肿瘤相关基因MMP-2和MMP-9的mRNA水平。进一步的实验发现,过表达HSP70和MRJ可上调ERK、FAK的磷酸化水平和p-AKT的表达,表明HSP70&MRJ和uPAR参与MAPK信号途径。HSP70和MRJ对uPAR及uRAR介导的生物学功能的调控可能为uPAR在肿瘤细胞转移中的作用机制提供一个新解释,并可能作为肿瘤治疗的新靶点。为了探讨MRJ在乳腺癌发生发展中的生物学功能,我们采用了RNA干扰和建立稳定细胞系的方法,检测MRJ（S）基因的降低对乳腺癌细胞中基质金属蛋白酶的影响和对细胞骨架的影响。将MDA-MB-231细胞转染载体pRNAT-U6.1/neo和干扰质粒pRNAT-U6.1/neo-MRJsi,用G418 （Zeocin） （600 μg/ml）筛选MRJ稳定干扰的细胞系,命名为MDA-MB-231/MRJsi。利用Q-PCR检测MDA-MB-231/MRJsi细胞和野生型细胞之间MRJ mRNA的水平差异。利用鬼笔环肽染色和anti-α-tublin的免疫荧光分析观察MDA-MB-231/MRJsi细胞系中微丝和微管的变化。同时,利用明胶酶谱法检测MDA-MB-231和MDA-MB-231/MRJsi细胞系中基质金属蛋白酶MMP-9的酶活性变化并进一步利用Q-PCR检测MRJ干扰后细胞内MMP-9的mRNA水平差异。结果表明：成功构建MRJ稳定干扰的MDA-MB-231/MRJsi稳定细胞系,与野生型MDA-MB-231细胞比较,MDA-MB-231/MRJsi细胞系中MRJ mRNA水平下降了50%（P<0.05）,但是转染空载pRNAT-U6.1/neo的乳腺癌细胞系筛选失败,以野生型MDA-MB-231细胞代替；细胞骨架微丝和微管发生重排；MMP-9酶活性增强,MMP-2酶活性无显著变化；MMP-9的mRNA水平显著上升（P<0.01）,与其酶活性水平变化一致。MDA-MB-231/MRJsi稳定细胞系提供了一个研究MRJ与乳腺癌发生发展关系的细胞模型。