shRNA慢病毒转染串珠素对大鼠硬膜外瘢痕中成纤维细胞增殖能力的影响

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目的椎板切除术后,硬膜外瘢痕形成是组织修复的正常生理过程,也是腰椎术后并发症之一,瘢痕组织与神经核硬膜的粘连会导致临床病理症状的复发,抑制瘢痕组织的过度增殖是预防腰椎术后失败的重要方法,本课题通过研究经串珠素shRNA慢病毒转染的大鼠硬膜外瘢痕组织成纤维细胞的增殖能力,探讨其影响硬膜外瘢痕组织形成的作用。为预防硬膜外瘢痕组织导致的手术失败提供新思路。方法30只Wistar大鼠行椎板切除术,建立模型,于培养2周后,提取硬膜外瘢痕组织。通过组织块贴壁法培养硬膜外瘢痕组织中的成纤维细胞,将细胞分为3组:shRNA慢病毒转染组(shRNA组内含GFP)、GFP慢病毒转染组(GFP组)、未转染组(空白对照组)。成纤维细胞转染成功后,分别通过Western-blot、荧光定量PCR及MTT法检测shRNA慢病毒转染组、GFP组及空白对照组3组成纤维细胞的RNA、蛋白质表达及细胞增殖的差异。结果Western-blot检测显示shRNA组串珠素蛋白明显低于GFP组和空白对照组。荧光定量PCR检测显示shRNA组串珠素RNA较GFP组和空白对照组表达低。MTT检测显示Oh,三组吸光度无明显差异,统计学无意义(P>0.05):24~96h shRNA组吸光度低于GFP组和空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论经shRNA慢病毒转染串珠素能抑制大鼠硬膜外瘢痕组织成纤维细胞的增殖。
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