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内生放线菌广泛存在于植物组织中,被认为是潜在的天然产物的资源库。茶树在人类健康中起着极其重要的作用,尤其是中国人日常生活中不可或缺的组成部分,然而我们对茶树内生放线菌功效的了解少之甚少。本文通过可培养方法,以14株从茶树中提取的内生放线菌作为本次实验的试验对象,通过对市场上常见的4种病原菌测定果蔬的抗菌活性,筛选出抗菌活性最好的菌种,并应用于上海青的贮藏保鲜过程中。为进一步鉴定内生菌的抗菌能力,阐明内生菌的作用,为市面常见的果蔬的贮藏保鲜提供数据支持和生物防治措施。进行抑菌活性的筛选和果蔬保鲜的测定,通过分子生物学、微生物生态学为评价内生菌生防作用提供理论依据。主要研究成果如下:经研究发现,表面消毒的茶叶材料经NA和TSA培养基检验,经过28℃条件下培养2周,未有见微生物菌落,这表明该培养基灭菌效果有效。通过采用16S rRNA基因测序分析,并将16S rRNA基因序列相似度大于98%的归为同一物种,以鉴定内生放线菌的多样性。我们发现从紫娟品种的叶片样品分离出来的内生放线菌分布于放线菌的7个属中:短状杆菌属(3株)、枯草芽孢杆菌属(1株)、考克氏菌属(4株)、亮杆菌属(1株)、微球菌属(4株)、微杆菌属(1株)、和链霉菌属(2株)。从云抗-10号的叶片样品分离出来的内生放线菌分布于放线菌的8个属中:枯草芽孢杆菌属(10株)、微球菌属(3株)、分枝杆菌属(3株),假节杆菌属(1株)、短状杆菌属(1株)、考克氏菌属(4株)、微杆菌属(5株)、糖单孢菌属(1株),共计15个属的44株菌株,其中紫娟品种的微球菌属16S rRNA基因序列相似度为97%,低于98%,故不将其进行后续试验。通过对紫娟、云抗-10号两品种的比较,发现亮杆菌属和链霉菌属是紫娟品种的特有放线菌属、分枝杆菌属、假节杆菌属、糖单孢菌属为云康10号特有放线菌属。14株茶树内生放线菌应用于4种常见果蔬的病原菌的抑菌活性具有显著差异、表现不一。抑菌活性试验结果如下:1.共计8株内生放线菌菌株在通过5mm滤纸片法对于表皮葡球菌(Staphylococcus epidermidis)显示抑菌活性,其中YXT131所产生的抑菌圈大小明显;对于福氏志贺氏菌(Sh.Aexneri),YXN112、YXT131、YKFG1121、YKFH1122 所产生的抑菌圈大小明显;YXT131、YKFG11212株内生放线菌菌株对于大肠埃希氏菌(Escherichia coli)存在抑菌活性,有抑菌圈显示;对于蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus),没有内生放线菌菌株产生抑菌活性,均无抑菌圈产生。同时对于表皮葡球菌(Staphylococus epidermidis)、福氏志贺氏菌(Sh.flexneri)、大肠埃希氏菌(Escherichia coli)有抑菌作用只有YXT131、YKFG1221两株内生菌株:其中YXT131菌株的抑菌作用显著;但同样未发现对蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)有抑制作用的内生菌株。2.通过YXT131的滤纸片法和打孔法的进一步验证,说明YXT131内生菌株的发酵滤液对于4种常见果蔬病原菌均有优良的抑菌活性,具有广谱抑菌效果。3.通过抑菌活性关键合成酶PKS-Ⅰ、PKS-Ⅱ、NRPS的筛选验证,证明内生放线菌的关键抑菌活性合成酶基因聚酮合酶PKS-Ⅰ、PKS-Ⅱ以及非核糖体多肽合成酶NRPS产生抑菌活性,对4种果蔬上常见的病原微生物有明显的拮抗作用。4.通过上海青的果蔬保鲜几个参数测定,在腐烂率测定上,发酵滤液组在贮藏10d的腐烂率比对照组低了 30%,呈显著性差异(p<0.05);在质量损失率测定上,在贮藏10d后,发酵滤液组的失重率为4.5%,相比于对照组(8.9%)降低了 49.44%,呈显著性差异(p<0.05);在Vc含量测定上,在10d,对照组与发酵滤液组Vc含量比较呈极显著差异(p<0.01);在叶绿素含量测定上,在10d时,对照组叶绿素含量下降至0.107mg/g,比0d下降47.80%,发酵滤液组比0d下降22.93%,高于对照组47.66%,呈显著差异(p<0.05);在可滴定酸含量测定上,在10d,对照组的可滴定酸含量降低至0.83nmol/100g,相比0d下降53.57%,发酵滤液组下降21.14%,同比高于对照组66.27%,呈极显著差异(p<0.01)。