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目的：1.建立顺铂诱导的胃癌多药耐药细胞株SGC7901/DDP,为研究其多药耐药的生物学特性提供细胞模型；2.初步探讨雌激素受体拮抗剂三苯氧胺(TAM)对胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP的耐药逆转机制。研究内容和结果：采用逐步递增顺铂浓度持续作用的方法诱导胃癌细胞SGC7901耐药,培养耐顺铂的胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP。应用倒置显微镜观察耐药株SGC-7901/DDP生物学特征的变化,通过细胞计数法绘制细胞生长曲线,计算耐药细胞株的群体倍增时间。CCK-8法测定SGC7901/DDP细胞的耐药指数及交叉耐药性。荧光定量PCR检测SGC7901/DDP细胞和SGC7901细胞耐药相关基因的表达。结果发现：采用逐步递增DDP药物浓度方法诱导以后,SGC-7901/DDP细胞较SGC-7901细胞胞体略增大,细胞核增大,形状更为不规则,并可见散在的多核瘤巨细胞,SGC-7901/DDP,其对顺铂的耐药指数为9.86倍,且此细胞对临床常用化疗代表药物盐酸阿霉素(ADM)氟尿嘧啶(5-Fu)也分别具有2.51和5.69倍的交叉耐药性,同时应用流式细胞分析细胞周期分布和细胞内罗丹明123浓度；结果表明：与亲本细胞相比,SGC-7901/DDP细胞S期细胞减少,而G1、G2期细胞增多,耐药细胞蓄积罗丹明123的能力较亲本细胞明显下降,稳定三个月后其耐药特性不变,因此成功建立了生物学性状稳定的人胃癌耐药细胞株SGC-7901/DDP,该细胞株的建立为深入研究人低分化胃腺癌多药耐药发生机制奠定了基础。二.耐药胃癌细胞多药耐药机制的研究为探讨胃癌细胞SGC-7901/DDP多药耐药的机制,我们采用实时荧光定量PCR (Real time Quantitative PCR)检测了耐药相关基因及凋亡相关基因的的mRNA表达,结果发现SGC-7901/DDP细胞MDR-1、MRP-1、MRP-2、MRP-3、MRP-5、ERCC1, Survivin表达较SGC-7901升高；SGC-7901/DDP细胞的凋亡相关基因Bax、Caspase-3表达明显下降,Bcl-2表达显著升高。Western-blot检测耐药相关蛋白P-gp和survivin的表达,结果发现SGC-7901/DDP细胞内P-gp和Survivin的表达较SGC-7901细胞显著上调,这些结果提示了MDR-1、MRP-1、MRP-2、MRP-3、MRP-5、ERCC1、Survivin、Bax、Caspase-3、Bcl-2参与了胃癌细胞SGC-7901/DDP多药耐药性的形成,提示多种耐药机制参与了DDP引起的胃癌细胞耐药。三.雌激素拮抗剂三苯氧胺对SGC-7901/DDP耐药逆转作用的研究为研究三苯氧胺(TAM)可否逆转SGC-7901/DDP细胞的多药耐药性,用CCK-8法观察不同浓度的TAM对SGC-7901和SGC-7901/DDP细胞增殖的影响,以及TAM对SGC-7901/DDP细胞的耐药逆转作用,发现TAM能够有效逆转SGC-7901/、DDP的多药耐药。应用流式细胞仪器检测TAM作用SGC-7901/DDP细胞前后细胞内罗丹明123的蓄积浓度,结果发现在TAM作用于SGC-7901/DDP后,细胞内积累罗丹明123的能力显著提高,表明TAM可减少药物的外排逆转SGC-7901/DDP多药耐药性。四.为了解TAM逆转胃癌细胞SGC-7901/DDP多药耐药性的机制,我们采用实时荧光定量PCR(Real time Quantitative PCR)检测了耐药相关基因的mRNA表达。结果发现：经TAM作用SGC-7901/DDP后MDR-1、MRP-1、MRP-2、MRP-3、MRP-5、ERCC1、Survivin表达较未作用组降低。检测了凋亡相关基因的mRNA的表达,经TAM处理SGC-7901/DDP后：Bax、Caspase-3表达明显升高,Bcl-2表达显著下降。Western-blot检测耐药及凋亡相关蛋白P--gp和survivin的表达,结果发现经TAM作用后SGC-7901/DDP细胞P-gp和survivin表达下降。这些结果提示了三苯氧胺可通过调节这些基因或蛋白的变化来逆转胃癌细胞的多药耐药。因此对这些分子的研究有助于揭示胃癌细胞多药耐药的机制,可为研发与这些基因或蛋白的相关的药物提供依据。结论：1.通过逐步递增顺铂浓度持续诱导的方法建立了顺铂耐药胃癌细胞株SGC7901/DDP。2.SGC7901/DDP细胞株具有多药耐药特征,其耐药机制与群体倍增时间延长及多药耐药基因MDR-1、MRP-1、MRP-2、MRP-3、MRP-5、ERCC1、Survivin表达上调有关。P-糖蛋白、凋亡抑制蛋白Survivin可能参与其耐药机制的形成。3.雌激素拮抗剂三苯氧胺对耐药细胞SGC7901/DDP具有耐药逆转作用,其逆转机制与上调促凋亡基因Bax、Caspase-3表达,下调凋亡抑制基因Bcl-2、Survivin和耐药相关基因MDR-1、MRP1、MRP-2、MRP-3、MRP-5、ERCC1表达及下调P-糖蛋白、凋亡抑制蛋白Survivin表达有关。