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抗菌药是人类和动物抵抗细菌、病毒等引起感染的重要武器，为人类和动物的健康、减少养殖业损失提供了保障。抗菌药的不合理、不规范使用，导致大量耐药细菌的产生，直接或间接的威胁人类健康。因此，细菌耐药已经成为各个国家共同持续关注的公共卫生问题。黏菌素是临床治疗碳青霉烯类耐药菌的有效手段，可转移、可突变的黏菌素耐药基因mcr-1的发现，限制了黏菌素的使用。养禽业是我国的养殖支柱产业，食品动物尤其是鸡的安全，是人们关注的焦点。本研究旨在通过对鸡源大肠杆菌中黏菌素耐药菌株及mcr-1基因的检测，进一步研究携带mcr-1基因的鸡源大肠杆菌的多重耐药现象，及mcr-1的传播机制。
本试验以分离自河南、湖北、江西、陕西、湖南、山西、安徽的7个省份病死鸡的肝脏样品及粪便样品的182株鸡源大肠杆菌为试验对象。通过微量肉汤稀释法，检测鸡源大肠杆菌对黏菌素的耐药情况。药敏试验结果显示，49株鸡源大肠杆菌对黏菌素耐药，耐药率为26.92％(49/182)。通过PCR扩增，发现33株耐药菌携带mcr-1基因。在黏菌素耐药菌株中，mcr-1阳性率为67.35％(33/49)。同时检测7种常见抗菌药对mcr-1阳性鸡源大肠杆菌的最小抑菌浓度。结果显示，33株mcr-1阳性菌株对不同种类的抗菌药表现为耐药，对头孢类药物头孢噻呋、青霉素类药物阿莫西林、氟喹诺酮类药物恩诺沙星、四环素类药物多西环素的耐药率均为100％。对氨基糖苷类药物阿米卡星和庆大霉素的耐药率分别为33.33％和63.64％。通过PCR检测mcr-1阳性菌中耐药基因的携带情况。结果显示，33株携带mcr-1基因的菌株均携带blaTEM，检出率为100.00％，blaCTX-M-1G检出率为48.48％，tet(A)检出率为69.70％，oqxA、oqxB检出率都为39.40％，同时，也检测出了blacTX-M-9G、blaOXA-1、blaOXA-10、rmtB、tet(M)等基因，检出率分别为27.27％、24.24％、3.03％、18.18％、3.03％。
XbaI-PFGE聚类分析结果显示，本试验中菌株基因型相似性在70.8％～100％，分为21种PFGE型。MLST结果显示，32株mcr-1阳性大肠杆菌可分为22个ST型，有1株菌的7个等位基因序列组合没有匹配到ST型，优势ST型为ST69、ST93、ST10、ST2847。MLST分型与PFGE分型结果比较发现，大多数菌株分型结果相符合。
进一步通过接合转移实验探究mcr-1的水平转移能力，得到19株接合子，接合率57.58％(19/33)。19株接合子对黏菌素表现耐药，57.89％(11/19)的接合子对庆大霉素耐药。mcr-1基因的酶切克隆结果显示，虽然有碱基突变及氨基酸突变，但不影响mcr-1基因的功能。全基因组测序分析结果显示，mcr-1位于可水平转移的大小为～60kb的IncI2质粒上，mcr-1基因环境为nikeA-nikeB-mcr-1-pap2，该质粒不携带其它耐药基因。测序菌株携带的耐药基因大多位于染色体上，包括介导对大环内酯类、β-内酰胺类、四环素类、喹诺酮类、氨基糖苷类等耐药的基因，主要耐药机制为抗生素外排，抗生素失活、抗生素作用靶位点改变等。经过序列比对，菌株携带的含有blaTEM基因的片段与P7噬菌体有100％同源性，该片段可能来源于P7噬菌体。
本研究对携带mcr-1鸡源大肠杆菌的耐药特性和mcr-1传播机制进行探究，为减缓黏菌素耐药基因mcr-1的传播提供实验室依据。
本试验以分离自河南、湖北、江西、陕西、湖南、山西、安徽的7个省份病死鸡的肝脏样品及粪便样品的182株鸡源大肠杆菌为试验对象。通过微量肉汤稀释法，检测鸡源大肠杆菌对黏菌素的耐药情况。药敏试验结果显示，49株鸡源大肠杆菌对黏菌素耐药，耐药率为26.92％(49/182)。通过PCR扩增，发现33株耐药菌携带mcr-1基因。在黏菌素耐药菌株中，mcr-1阳性率为67.35％(33/49)。同时检测7种常见抗菌药对mcr-1阳性鸡源大肠杆菌的最小抑菌浓度。结果显示，33株mcr-1阳性菌株对不同种类的抗菌药表现为耐药，对头孢类药物头孢噻呋、青霉素类药物阿莫西林、氟喹诺酮类药物恩诺沙星、四环素类药物多西环素的耐药率均为100％。对氨基糖苷类药物阿米卡星和庆大霉素的耐药率分别为33.33％和63.64％。通过PCR检测mcr-1阳性菌中耐药基因的携带情况。结果显示，33株携带mcr-1基因的菌株均携带blaTEM，检出率为100.00％，blaCTX-M-1G检出率为48.48％，tet(A)检出率为69.70％，oqxA、oqxB检出率都为39.40％，同时，也检测出了blacTX-M-9G、blaOXA-1、blaOXA-10、rmtB、tet(M)等基因，检出率分别为27.27％、24.24％、3.03％、18.18％、3.03％。
XbaI-PFGE聚类分析结果显示，本试验中菌株基因型相似性在70.8％～100％，分为21种PFGE型。MLST结果显示，32株mcr-1阳性大肠杆菌可分为22个ST型，有1株菌的7个等位基因序列组合没有匹配到ST型，优势ST型为ST69、ST93、ST10、ST2847。MLST分型与PFGE分型结果比较发现，大多数菌株分型结果相符合。
进一步通过接合转移实验探究mcr-1的水平转移能力，得到19株接合子，接合率57.58％(19/33)。19株接合子对黏菌素表现耐药，57.89％(11/19)的接合子对庆大霉素耐药。mcr-1基因的酶切克隆结果显示，虽然有碱基突变及氨基酸突变，但不影响mcr-1基因的功能。全基因组测序分析结果显示，mcr-1位于可水平转移的大小为～60kb的IncI2质粒上，mcr-1基因环境为nikeA-nikeB-mcr-1-pap2，该质粒不携带其它耐药基因。测序菌株携带的耐药基因大多位于染色体上，包括介导对大环内酯类、β-内酰胺类、四环素类、喹诺酮类、氨基糖苷类等耐药的基因，主要耐药机制为抗生素外排，抗生素失活、抗生素作用靶位点改变等。经过序列比对，菌株携带的含有blaTEM基因的片段与P7噬菌体有100％同源性，该片段可能来源于P7噬菌体。
本研究对携带mcr-1鸡源大肠杆菌的耐药特性和mcr-1传播机制进行探究，为减缓黏菌素耐药基因mcr-1的传播提供实验室依据。