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目的:研究重型再生障碍性贫血(Severe aplastic anemia,SAA)患者与正常人外周血CD4~+T与CD8~+T淋巴细胞相对端粒长度;比较SAA患者与正常人CD4~+T与CD8~+T淋巴细胞相对端粒长度、细胞数量、细胞膜功能分子表达及细胞分泌细胞因子水平等指标,探讨SAA患者CD4~+T与CD8~+T淋巴细胞端粒相对长度与其数量、功能之间关系,从而阐明端粒缩短在SAA发病过程中起到重要作用。方法:本研究收集自2015年6月至2016年6月于天津医科大学总医院血液科收治的SAA患者共30例(其中初治22例,缓解8例)的外周血标本,其诊断及疗效评价均依据《再生障碍性贫血诊断与治疗中国专家共识》。正常对照组选择同期同种族及性别、年龄相仿的健康人共25例。第一部分应用密度梯度离心法分离SAA患者及正常对照组外周血单个核细胞;免疫磁珠法分选SAA者和正常对照组外周血中CD4~+T和CD8~+T淋巴细胞;采用流式荧光原位杂交法(flow cytometry fluorescence in situ hybridization,Flow-FISH)检测SAA患者及正常对照者外周血CD4~+T及CD8~+T淋巴细胞相对端粒长度。第二部分应用流式细胞术(FACS)分别检测SAA患者及正常对照CD4~+T和CD8~+T淋巴细胞数量及细胞膜表面功能受体(CD28、CD158及CD70)的表达水平;体外PMA+依诺霉素刺激后CD8~+T淋巴细胞,应用ELISA法检测SAA患者和正常对照CD8~+T淋巴细胞分泌Ⅰ型细胞因子IFN-γ和TNF-α水平;进一步分析CD4~+T和CD8~+T淋巴细胞相对端粒长度与淋巴细胞数量、功能分子表达的相关性。结果:1.SAA患者及健康人CD4~+T和CD8~+T淋巴细胞相对端粒长度初治SAA患者CD4~+T淋巴细胞相对端粒长度与正常对照组相比无显著统计学差((89.85±21.71)%vs(95.01±13.18)%,P=0.383),初治SAA患者与血象缓解组无统计学差异((89.85±21.71)%vs(84.18±10.01)%,P=0.315),血象缓解组外周血CD4~+T淋巴细胞相对端粒长度与正常对照组无统计学差(P=0.107)。初治SAA患者外周血CD8~+T淋巴细胞相对端粒长度显著低于正常对照组((95.71±9.11)%vs(76.57±16.88)%,P<0.001);血象缓解组较初治组SAA端粒长度有所恢复,但无统计学差异((76.57±16.88)%vs(89.85±21.71)%,P=0.06);血象缓解组与正常对照组相比仍无明显统计学差异(P=0.49);2.SAA患者及健康人CD4~+T和CD8~+T淋巴细胞数量应用流式细胞术检测CD4~+T淋巴细胞数量,SAA初治组、SAA血象缓解组及正常对照组的CD4~+T淋巴细胞数量分别为(359.17±267.58)/ul、(388.08±268.81)/ul和(327.12±74.36/ul,初治组的CD4~+T淋巴细胞数量与缓解组无明显差异(P=0.69),与正常对照组(P=0.58)也无明显差异,缓解组与正常对照组无统计学差异(P=0.37);SAA初治组、SAA血象缓解组及正常对照组的CD8~+T淋巴细胞数量分别为(871.70±473.03)/ul、(307.16±187.77)/ul和(269.51±96.53)/ul,初治组CD8~+T淋巴细胞数量显著高于缓解组(P<0.001)与正常对照组(P<0.001),缓解组CD8~+T淋巴细胞数量与正常对照组无统计学差异(P=0.61);3.SAA患者及健康人CD4~+T和CD8~+T淋巴细胞膜受体表达SAA患者CD4~+T淋巴细胞CD28分子表达水平与正常对照组相比无统计学差异((96.70+5.58)%vs(96.93+2.62)%,P=0.83);CD70分子表达水平与正常对照组相比无统计学差异((2.26+1.93)%vs(2.01+1.70)%,P=0.69);CD158分子表达与正常对照组相比无统计学差异((3.61+2.81)%vs(3.98+2.18)%,P=0.68);SAA患者CD8~+T淋巴细胞CD28分子表达明显低于正常对照组((56.56+20.89)%vs(66.53+17.82)%,P=0.033),CD70分子表达明显高于正常对照组((8.50+7.17)%vs(4.77+4.67)%,P=0.006),CD158分子表达与正常对照组相比无统计学差异((11.35+5.92)%vs(9.82+8.80)%,P=0.146);4.SAA患者及健康人体外刺激下CD8~+T淋巴分泌Ⅰ型细胞因子水平SAA患者CD8~+T淋巴细胞体外刺激下分泌IFN-γ水平明显高于正常对照((20.59+6.05)vs(15.82+4.21)U/ml,P=0.018);分泌TNF-α水平明显高于正常对照组((18.12+7.96)vs(11.49+4.72)U/ml,P=0.002);5.CD4~+T和CD8~+T淋巴细胞端粒长度与其数量相关性分析行CD4~+T和CD8~+T淋巴细胞端粒长度与其细胞数量相关性分析,发现CD4~+T淋巴细胞端粒长度与细胞数量无明显相关(r=-0.12,P=0.38),CD8~+T淋巴细胞端粒长度与细胞数量呈明显负相关(r=-0.28,P=0.03);6.CD4~+T和CD8~+T淋巴细胞端粒长度与其功能相关性分析行CD4~+T和CD8~+T淋巴细胞端粒长度与其功能相关性分析发现CD4~+T淋巴细胞相对端粒长度与CD28、CD70、CD158无明显相关(p>0.05),CD8~+T淋巴细胞端粒长度与CD28表达水平呈负相关(r=0.61,P=0.001),与CD70(r=-0.51,P=0.016),CD158(r=-53,P=0.005),细胞因子IFN-γ(r=-0.63,P=0.005),TNF-α(r=-0.58,P=0.006)及凋亡水平(r=-0.50,P=0.01)呈正相关。结论:1.初治SAA患者CD4~+T淋巴细胞端粒长度与免疫抑制治疗后血象缓解的SAA患者及健康人无明显差异,而初治SAA患者CD8~+T淋巴细胞端粒长度明显短于血象缓解SAA患者及健康人,其中血象缓解的SAA患者较初治SAA患者长度有所恢复,说明在SAA患者T淋巴细胞中以CD8~+T淋巴细胞SAA患者CD8~+T淋巴细胞的端粒缩短为主,免疫抑制治疗后端粒长度有所恢复。2.在SAA患者体内,CD8~+T淋巴细胞数量升高,细胞膜功能分子CD28表达下降,CD70表达增加,分泌I型细胞因子IFN-γ,TNF-α能力增强,由此说明CD8~+T淋巴细胞功能处于亢进状态。3.我们行SAA患者CD8~+T淋巴细胞端粒相对长度与其数量及功能分子的相关性分析,发现CD8~+T淋巴细胞端粒长度与CD28表达的呈正相关,与细胞数量,CD158和CD70的表达,IFN-γ和TNF-α的分泌及凋亡水平均呈负相关。这说明在SAA患者中,端粒缩短的CD8~+T淋巴细胞可能更容易处于激活状态,并且参与SAA的发病过程中。