近二十年来,胃癌仍然是全球癌症死亡的主要原因,每年新发病例21,900,死亡达13,500,预后极差。我国是胃癌的高发地区,即使采用广泛的淋巴结清扫的肿瘤根治术,5年生存率在35%以下。治疗失败的主要原因为就诊患者大多数为浆膜受侵的进展期。腹膜是胃癌常见的复发转移部位,在胃癌手术病人中,术后以腹膜复发转移为常见类型,占复发转移病人的33-50%左右,部分病人腹膜是肿瘤复发转移的唯一部位,出现腹膜转移的患者5年生存率仅20%,半数以上的患者最终死于腹膜复发、腹膜种植转移。由于胃癌一旦发生广泛的腹膜播散(peritoneal dissemination PD)后,目前还没有有效的治疗手段,对晚期病例,手术不可能切除大面积转移灶以改善生存和提高患者的生活质量。 因此,如何正确地筛检腹膜复发转移的高危病例,并给予适当的治疗,如手术切除结合腹腔内温热灌注化疗等综合手段,有望改进生存。传统的腹腔冲洗液细胞学检测、螺旋CT、超声及腹腔镜难以发现早期腹腔内脱落的游离癌细胞(exfoliated cancer cells,ECC),灵敏度低,部分阳性患者仍有腹膜复发。因此找到一种高敏感度和特异性的检测腹膜转移的方法是非常必要的。 近年来,出现了荧光免疫细胞化学和逆转录酶联反应(reverse transcriptase-polymetase chain reaction RT-PCR)法检测各类癌症病人骨髓、外周血及腹腔冲洗液中的癌细胞,为胃癌腹膜播散提供早期诊断和科学分期的新方法,同时也使检测微量肿瘤细胞成为可能,对腹膜已存在的微小转移病灶的患者,尽早地进行手术切除联合腹腔内温热灌注化疗,消灭隐匿病灶,成为治疗成功的关键。 一般情况下,腹腔中是不存在上皮细胞的,若腹腔中检出上皮抗原,如角蛋白(cytokeratin CK)系列和CEA等,说明存在上皮来源的细胞,最可能是癌细胞。国内外近年来有少数几篇有关RT-PCR检测腹腔中癌细胞的文章,对此项测定有争议,因为:腹腔内污染可导致正常腹腔冲洗液癌细胞检测假阳性,白细胞、间皮细胞存在非法转录等。本课题以消除假阳性和非法转录为切入点。首先摸索出一种快速、简单采集腹腔冲洗液的方法,然后建立成熟的RT-PCR反应体系和条件,最后通过观察各期胃癌腹腔冲洗液CEAmRNA、CK19mRNA、CK20mRNA、