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实验一特异性阻断TREM-1对内毒素致ALI小鼠保护作用的研究
目的:探讨人工合成的TREM-1抑制剂LP17特异性阻断TREM-1对内毒素致ALI小鼠的保护作用及其机制。
方法:36只BALB/C小鼠随机分为3组:生理盐水对照组、ALI组和LP17组,腹腔注射脂多糖(LPS)建立小鼠ALI模型,LP17组静脉注射LP173.5mg/kg,后两组按不同时间点(6h、12h、24h、48h)又分为4个亚组,观察各时点肺组织病理改变,并采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定各时点肺组织匀浆及血清中肿瘤坏死因子-a(TNF-a)、白介素-10(IL-10)、TREM-1和可溶性髓系细胞触发受体-1(sTREM-1)的含量,同时应用荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各时点TREM-1mRNA的表达。
结果:与同时点ALI组相比,(1)LP17组12h、24h、48h肺组织病理Smith评分显著降低(P<0.05)。(2)LP17组12h、24h肺组织匀浆中TNF-a水平显著降低(P<0.05);LP17组24h和48h血清中 TNF-a水平显著降低(P<0.05);LP17组48h血清及肺组织匀浆中IL-10水平显著升高(P<0.05);(3)LP17组12h、24h肺组织匀浆中TREM-1水平显著降低(P<0.05);LP17组12h血清中sTREM-1水平均显著降低(P<0.05);LP17组各时点血液中TREM-1mRNA表达均显著降低(P<0.05);肺组织匀浆中12h、48hTREM-1mRNA表达显著降低(P<0.05)。
结论:LP17可特异性阻断TREM-1,减轻内毒素致ALI小鼠肺部炎症反应,对于肺组织中TREM-1基因水平影响较小。
实验二调控TREM-1对内毒素致ALI小鼠肺部炎症反应作用的研究
目的:观察以抗髓系细胞触发受体-1单克隆抗体(抗TREM-1mAb)特异性激活TREM-1对ALI小鼠肺部炎症反应的影响。
方法:36只BALB/C小鼠随机分为3组:生理盐水对照组、ALI组和单抗组,腹腔注射LPS建立小鼠ALI模型,单抗组腹腔注射抗TREM-1mAb250ug/kg,后两组按不同时间点(6h、12h、24h、48h)又分为4个亚组,观察各时点肺组织病理改变,并采用ELISA法测定各时点肺组织匀浆及血清中TNF-a、IL-10、TREM-1和sTREM-1的含量,同时应用荧光定量RT-PCR法检测各时点TREM-1mRNA的表达。
结果:(1)ALI组肺组织病理Smith评分于12h达高峰,单抗组病理改变随时间变化呈逐渐加重趋势,48h较ALI组显著升高(P<0.05)。(2)与同时点ALI组相比,单抗组肺组织匀浆中TNF-a水平于24h达高峰,48h显著升高(P<0.05);单抗组血清中TNF-a水平于12h达高峰,6h和48h显著升高(P<0.05);单抗组肺组织匀浆及血清中IL-10水平各时点均维持在较高水平,48h显著升高(P<0.05)。(3)与同时点ALI组相比,单抗组肺组织匀浆TREM-1水平随时间变化呈逐渐升高趋势,48h TREM-1水平显著升高(P<0.05),血清中sTREM-1水平随时间变化呈逐渐下降趋势,各时点均显著升高(P<0.05)。单抗组各时点血液及肺组织中TREM-1mRNA表达均显著升高,48h肺组织TREM-1mRNA的表达上升13倍(P<0.05)。
结论:抗TREM-1mAb特异性激活 TREM-1可促进炎症因子释放,加重内毒素致ALI小鼠的肺部炎性反应。
实验三 TREM-1的信号传导在内毒素致ALI小鼠肺部作用的研究
目的:通过特异性激活或阻断 TREM-1观察其在小鼠内毒素致ALI中的信号传导通路及其对炎性反应的影响。
方法:52只BALB/C小鼠随机分为4组:生理盐水对照组、ALI组、LP17组和单抗组,腹腔注射LPS建立小鼠ALI模型,LP17组静脉注射LP173.5mg/kg,单抗组腹腔注射抗 TREM-1mAb250ug/kg,采用免疫组化法测定各组6h、12h、24h和48h肺组织中核转录因子-κB(NF-κB)的表达,并采用ELISA法测定各时点血清和肺组织匀浆中TNF-a、IL-10、sTREM-1及TREM-1的含量,同时观察各组各时点肺组织形态学改变,比较肺组织病理Smith评分。
结果:与同时点ALI组相比,(1)单抗组NF-κB p65的活化程度随时间变化逐渐增加,48h显著升高(P<0.01);LP17组肺组织NF-κB p65的活化程度随时间变化逐渐降低,12h、24h和48h显著降低(P<0.001)。(2)单抗组肺组织匀浆及血清中各时点肺组织 TNF-a水平均维持在较高水平,48h显著升高(P<0.05);LP17组肺组织匀浆中 TNF-a水平12h和24h显著降低(P<0.05):单抗组和LP17组血清中及肺组织匀浆中各时点IL-10水平均维持在较高水平,48h显著升高(P<0.05)。(3)单抗组肺组织匀浆中TREM-1水平随时间变化呈逐渐升高趋势,48h显著升高(P<0.05),血清中sTREM-1水平随时间变化呈逐渐降低趋势,各时点均显著升高(P<0.05);LP17组12h和24h肺组织匀浆中TREM-1水平显著降低(P<0.05)。(4)单抗组肺组织病理Smith评分随时间变化呈逐渐上升趋势,48h显著升高(P<0.05),而LP17组12h、24h、48h肺组织病理Smith评分均显著降低(P<0.05)。
结论:TREM-1表达可通过NF-κB激活途径激活炎症反应,促进炎症因子释放,导致ALI的肺部病理改变。