盐酸川芎嗪对鸡传染性法氏囊病的作用及机制

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目的:建立鸡传染性法氏囊病疾病(Infectious bursal disease,IBD)模型;探讨盐酸川芎嗪(Ligusticum chuanqiong Hort,LH)对鸡IBD的作用效果及其效应机制。方法:雏鸡接种IBDV建立IBD疾病模型,观察临床症状和病理学变化来评价模型的建立。将21日龄未接种传染性法氏囊病病毒(Infectious Bursal Disease Virus,IBDV)疫苗、IBDV抗体检测阴性的健康海兰褐雏鸡200只,按照单因素完全随机分成8组,每组25只。A组为空白对照组(正常组),B组为阴性对照组(IBD模型组),C、D组为阳性药物对照组,其中C为利巴韦林组(Ribavirin,RV),D为黄芪多糖组(Astragalus polysaccharides,APS),E、F、G、H组为实验组(LH预防组以及LH高、中、低剂量组)。鸡28日龄时,除A组鸡腹腔注射0.2mL PBS溶液外,其他试验组的滴鼻点眼接种IBDV-BC6/85强毒株的病毒稀释液0.2mL。E组(LH预防防组,50mg/kg/d)于25日龄开始饮水给药预防,C组(RV组,26mg/kg/d).D组(APS组,10mg/kg/d).F(LH高剂量组,100mg/kg/d)、G(LH中剂量组,50mg/kg/d)、H(LH低剂量组,25mg/kg/d)于31日龄开始饮水给药治疗,D组为肌肉注射给药。各组于27、30、37、44日龄采血,分离血清,采用ELISA检测血清中IFN-γ、IFN-β和IBDV-Ab含量,MTT法检测外周血T淋巴细胞增殖情况,检测各组免疫器官指数,流式细胞仪检测淋巴细胞指数,用实时荧光定量PCR检测IBDV特异基因VP1及鸡TLR3基因的表达量。结果显示:1.通过IBDV-BC6/85株人工感染后,雏鸡在攻毒后的临床症状、病理学观察和在PCR检测显示本试验成功建立鸡IBD疾病模型。2.攻毒后,病毒对照组脾脏指数显著高于空白对照组(P<0.05),法氏囊指数和胸腺指数显著低于空白对照组(P<0.05),各LH药物组的免疫器官指数在病毒对照组和空白对照组之间,其中LH高剂量组最为明显。说明LH可以缓解IBDV造成的法氏囊、脾脏、胸腺等的损害,促进免疫器官的发育,高剂量组效果最好。3.LH高剂量组和预防组对诱导IFN-β、IFN-γ有显著的增强作用(P<0.05),并显著高于空白组与病毒组(P<0.05),LH高剂量组和预防组对IFN的表达有促进作用。4.LH各组都能提高外周血CD4+/CD8+的比值和T淋巴细胞的水平,且显著大于病毒组和空白组(P<0.05),其中LH高剂量组和预防组的提升效果最高,而其他两个剂量组则低于利巴韦林和黄芪多糖对照组。说明LH能提高CD4+/CD8+的比值和T淋巴细胞的水平,且LH高剂量组和预防组效果最明显。5.LH各组和药物对照组都能提高IBDV抗体水平,其中以LH高剂量组最为明显,并且极显著高于空白组和病毒组(P<0.01),显著高于利巴韦林组和黄芪多糖组(P<0.05)。说明LH能提高抗体水平,又以高剂量组的效果最为明显。6.LH各组和阳性药物对照组都能降低VP1的数值并显著低于病毒组,但是LH低剂量组VPl的表达量却极显著高于其他组(P<0.01)。说明LH能抑制病毒的复制,并且高剂量和中剂量效果更好,剂量越低,效果越差。7.LH各组和药物对照组都能提高TLR3的表达量,同时高于病毒组,其中高剂量组最为显著(P<0.05)。因此说明LH能促进TLR3的表达,其中高剂量组效果最好。结论:1.LH可以显著促进IBD雏鸡的免疫器官的发育;2.LH可以提高IBD感染鸡的抗体水平,促进机体的体液免疫水平;3.LH可上调IFN-β的表达量、IFN-γ的表达量,同时还可以提高T淋巴细胞指数以及周血CD4+/CD8+的比值,改善IBD雏鸡的细胞免疫;4.LH可以降低组织中病毒复制所需蛋白VP1的表达量、促进TLR3的表达,有效抑制病毒的增殖,提高先天性免疫功能。
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