【摘 要】
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近年来,随着蚕种生产规模的不断扩大,蚕种生产中非滞育卵的产生时有发生,从而给蚕种场带来损失,并引起蚕农对蚕种质量的疑虑。为减少非滞育卵的发生,避免用种季度错失,浪费蚕种而造成经济损失,提高良种繁育技术就变得尤为重要。同时,有时也会因为天气等原因,出现养蚕供种计划需要调整,出库后的蚕种需回库冷藏的问题。为此,如何更好地应对解决产业上的问题,需要深入研究。根据以上生产实际需求,本试验探讨了家蚕催青温度
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近年来,随着蚕种生产规模的不断扩大,蚕种生产中非滞育卵的产生时有发生,从而给蚕种场带来损失,并引起蚕农对蚕种质量的疑虑。为减少非滞育卵的发生,避免用种季度错失,浪费蚕种而造成经济损失,提高良种繁育技术就变得尤为重要。同时,有时也会因为天气等原因,出现养蚕供种计划需要调整,出库后的蚕种需回库冷藏的问题。为此,如何更好地应对解决产业上的问题,需要深入研究。根据以上生产实际需求,本试验探讨了家蚕催青温度光照及大蚕饲养温度、蚕卵浸酸后冷藏时间等对家蚕产非滞育卵影响;同时通过转录组测序与q RT-PCR技术,从分子水平上研究滞育与非滞育家蚕的差异基因表达谱,进一步研究家蚕滞育的分子机理。取得的结果如下:1.根据催青条件和饲养温度对二化性家蚕品种932产非滞育卵的影响,得出低温（16℃）短光照（6h）下催青,大蚕及蛹期27℃饲养,非滞育卵发生率达100%。2.将浸酸解除滞育后的二化性家蚕品种932蚕卵,进行低温（4℃）冷藏,发现当冷藏时间达到12d及以上时,开始出现非滞育卵的产生。3.通过转录组测序的方法,对常温（25℃）和低温（16℃）催青至点青期的蚕卵及其各自饲养后的熟蚕经过3d及化蛹后经过3d的卵巢组织进行ONT三代测序,检测经过不同催青处理后,各发育时期的基因表达差异。在蚕卵、熟蚕体及蛹体卵巢中分别检测有15257个、17150个及17150个基因,其中常温和低温催青处理的蚕卵、熟蚕体及蛹体卵巢中差异基因分别有93个,1489个及161个基因差异表达。低温催青较常温催青的蚕卵,上调及下调的基因分别为24个和79个;低温催青发育至熟蚕期3d较常温催青发育至熟蚕期3d,上调及下调的基因分别为1422个和67个;低温催青发育至化蛹3d较常温催青发育至化蛹3d,上调及下调的基因分别为92和69个。这些差异基因主要集中在物质交换与能量代谢等通路中。4.家蚕Bm DH与Bm DHR1-5基因的克隆。以932家蚕的头与卵巢为材料,提取总RNA,反转录成c DNA,设计特异引物,通过PCR扩增获得并克隆了Bm DH与Bm DHR1-5基因,其长度分别为687 bp、1533bp、1533bp、1111 bp、1326 bp及1164 bp。5.家蚕Bm DH、Bm DHR、Bm AR与Bm FBA基因的表达谱分析。结合通路富集与差异表达分析,选取Bm DH、Bm DHR、Bm AR与Bm FBA四个基因,利用荧光定量PCR技术,检测其在催青期蚕卵、五龄1-5d、熟蚕1-3d、蛹期3-7d的卵巢组织中的表达量变化。结果显示,经过常温催青与低温催青,同一基因在不同处理家蚕组织中,随着发育时期的变化,表达量也随之变化,且差异明显。说明这些基因在滞育与非滞育过程中,参与到不同的代谢通路,产生了不同的影响。
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