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背景：
恶性肿瘤是全世界各个国家/地区的主要死亡原因，对世界人民生命健康造成了极大威胁，肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma, HCC)作为恶性肿瘤中的重要一员，其死亡率位居我国恶性肿瘤死亡顺位第二位。其发生发展机制复杂，目前并未完全阐明。因此，探究肝细胞癌增殖、凋亡的具体机制，寻找有效的诊断标志物、治疗靶点有着重要意义。
FEN1(Flap Endonuclease 1)是一种结构特异性的核酸内切酶，主要参与DNA复制和长片段碱基切除修复，对维持基因组的保真性至关重要。FEN1突变或功能缺失可能会促进癌症的进展。
目的：
1.探索FEN1对肝癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的调控效应。
2.运用转录组测序探讨FEN1对肝癌细胞生物学过程的调控机制。
方法：
1.采用慢病毒转染技术对MHCC97-H细胞的FEN1进行敲减，对SMMC-7721细胞的FEN1进行过表达，应用RT-qPCR联合免疫蛋白印迹法分析(western blot)检测FEN1的mRNA和蛋白水平，经嘌呤霉素筛选后得到相应的稳定表达的细胞株。
2.平板克隆实验检测敲减/过表达FEN1对肝癌细胞增殖的影响；流式细胞术检测细胞周期及凋亡的变化。
3.对FEN1敲减细胞及其对照组进行转录组测序，通过生物信息学分析FEN1敲减后的差异基因和信号通路，探索FEN1调控肝癌细胞生物学过程的机制。
4.westernblot检测FEN1对关键信号通路活化和凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达的影响，并使用PI3K抑制剂LY294002探讨PI3K-Akt是否参与FEN1对肝癌细胞增殖、凋亡的调控。
结果：
1.成功构建MHCC97-HFEN1敲减细胞株MHCC97-Hsh3-FEN1(或称MHCC97-Hsh6265，对照组sh-control)，SMMC-7721FEN1过表达细胞株SMMC-7721OE-FEN1(对照组OE-NC)。
2.平板克隆实验显示MHCC97-Hsh3-FEN1组细胞增殖能力减弱，SMMC-7721OE-FEN1组增殖能力增强(P＜0.01)；流式细胞术结果显示敲减组细胞凋亡增加，过表达组细胞凋亡减少；流式细胞术检测细胞周期，敲减FEN1后，G0/G1期增加，S期减少，提示FEN1表达减少后，细胞在G1期阻滞，不能顺利进入S期完成DNA的复制过程。过表达FEN1后，S期增加，G0/G1期和G2/M期减少，提示FEN1表达增加后，细胞DNA复制增加，增殖活跃。
3.细胞转录组测序结果的生物信息学分析表明：以|Log2FC|＞0.585，FDR＜0.05作为截断值，MHCC97-Hsh3-FEN1对比sh-control共鉴定1712个显著差异基因(DEGs)，包括817个上调的DEGs，和895个下调的DEGs，KEGG信号通路结果显示DEGs参与PI3K-Akt在内的多个肿瘤相关信号通路。
4.过表达FEN1后，Bax表达降低，p-Akt，Bcl-2表达增加，Akt无明显变化，提示FEN1可激活PI3K-Akt信号通路。PI3K抑制剂LY294002可抑制Akt的激活，上调Bax并抑制Bcl-2的表达。
结论：
肝癌中高表达的FEN1，可能通过激活PI3K-Akt信号通路调控肝癌细胞增殖，凋亡和周期。
恶性肿瘤是全世界各个国家/地区的主要死亡原因，对世界人民生命健康造成了极大威胁，肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma, HCC)作为恶性肿瘤中的重要一员，其死亡率位居我国恶性肿瘤死亡顺位第二位。其发生发展机制复杂，目前并未完全阐明。因此，探究肝细胞癌增殖、凋亡的具体机制，寻找有效的诊断标志物、治疗靶点有着重要意义。
FEN1(Flap Endonuclease 1)是一种结构特异性的核酸内切酶，主要参与DNA复制和长片段碱基切除修复，对维持基因组的保真性至关重要。FEN1突变或功能缺失可能会促进癌症的进展。
目的：
1.探索FEN1对肝癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的调控效应。
2.运用转录组测序探讨FEN1对肝癌细胞生物学过程的调控机制。
方法：
1.采用慢病毒转染技术对MHCC97-H细胞的FEN1进行敲减，对SMMC-7721细胞的FEN1进行过表达，应用RT-qPCR联合免疫蛋白印迹法分析(western blot)检测FEN1的mRNA和蛋白水平，经嘌呤霉素筛选后得到相应的稳定表达的细胞株。
2.平板克隆实验检测敲减/过表达FEN1对肝癌细胞增殖的影响；流式细胞术检测细胞周期及凋亡的变化。
3.对FEN1敲减细胞及其对照组进行转录组测序，通过生物信息学分析FEN1敲减后的差异基因和信号通路，探索FEN1调控肝癌细胞生物学过程的机制。
4.westernblot检测FEN1对关键信号通路活化和凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达的影响，并使用PI3K抑制剂LY294002探讨PI3K-Akt是否参与FEN1对肝癌细胞增殖、凋亡的调控。
结果：
1.成功构建MHCC97-HFEN1敲减细胞株MHCC97-Hsh3-FEN1(或称MHCC97-Hsh6265，对照组sh-control)，SMMC-7721FEN1过表达细胞株SMMC-7721OE-FEN1(对照组OE-NC)。
2.平板克隆实验显示MHCC97-Hsh3-FEN1组细胞增殖能力减弱，SMMC-7721OE-FEN1组增殖能力增强(P＜0.01)；流式细胞术结果显示敲减组细胞凋亡增加，过表达组细胞凋亡减少；流式细胞术检测细胞周期，敲减FEN1后，G0/G1期增加，S期减少，提示FEN1表达减少后，细胞在G1期阻滞，不能顺利进入S期完成DNA的复制过程。过表达FEN1后，S期增加，G0/G1期和G2/M期减少，提示FEN1表达增加后，细胞DNA复制增加，增殖活跃。
3.细胞转录组测序结果的生物信息学分析表明：以|Log2FC|＞0.585，FDR＜0.05作为截断值，MHCC97-Hsh3-FEN1对比sh-control共鉴定1712个显著差异基因(DEGs)，包括817个上调的DEGs，和895个下调的DEGs，KEGG信号通路结果显示DEGs参与PI3K-Akt在内的多个肿瘤相关信号通路。
4.过表达FEN1后，Bax表达降低，p-Akt，Bcl-2表达增加，Akt无明显变化，提示FEN1可激活PI3K-Akt信号通路。PI3K抑制剂LY294002可抑制Akt的激活，上调Bax并抑制Bcl-2的表达。
结论：
肝癌中高表达的FEN1，可能通过激活PI3K-Akt信号通路调控肝癌细胞增殖，凋亡和周期。