论文部分内容阅读
目的：大量实验表明,骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stemcells,BMSCs)能够提高受损心脏的功能,其机制与促进心肌和血管再生,抑制心脏重构,抗心肌细胞凋亡等功能有关。本实验通过研究BMSCs对新生大鼠心室肌细胞(neonatal rat ventricular myocytes,NRVMs)Kv4.2表达的影响,探讨BMSCs提高心脏功能的机制。
方法：(1)全骨髓培养法分离健康未成年SD大鼠的BMSCs,原代及传代培养。(2)出生3天内的新生SD大鼠的NRVMs原代培养,并将传至第三代的BMSCs和NRVMs二者按照1∶10的比例进行共培养,单独培养的NRVMs作对照;HEK293细胞传代培养作对照(3)流式细胞仪检测BMSCs纯度;(4)观察NRVMs搏动及生长情况;(5)逆转录PCR检测Kv4.2和Kv4.3 mRNA的表达;(6)Elsia检测BMSCs及NRVMs无血清培养液中bFGF和IGF-1的含量;(7)bFGF/IGF-1孵育NRVMs72后,逆转录PCR检测Kv4.2和Kv4.3mRNA的表达。
结果：(1)与BMSCs共培养的NRVMs搏动频率高于对应时间点的单独培养NRVMs的搏动频率;(2)流式细胞技术鉴定BMSCs,BMSCs特异性标记物CD29+的细胞达91.9％,造血干细胞特异性标记物CD34+的细胞小于1％;(3)共培养9天后NRVMs的Kv4.2mRNA的表达量显著高于单独培养的NRVMs,Kv4.3mRNA的表达量两组间没有显著差异;(4)BMSCs培养液bFGF和IGF-1的含量高于NRVM培养液的含量;(5)bFGF孵育NRVMs72h后,Kv4.2mRNA的表达量高于未经bFGF处理的细胞,而IGF-1孵育NRVMs72h后Kv4.2、Kv4.3的表达量无显著变化。
结论：共培养NRVMs搏动频率增加,BMSCs通过分泌bFGF,增加NRVMsKv4.2的表达。