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本研究通过对卡氏肺孢子虫(Pneumocystis carinii,Pc)体外无细胞系培养体系摸索，建立了Pc体外无细胞培养方法，并运用该培养体系研究了瑞香素在体外抗Pc的作用，获得如下结果和结论。1. 建立了较为稳定的Pc体外无细胞培养方法。通过对YPAD 、YEA、NPG、RPMI1640及IMDM多种基础培养基的筛选并反复摸索Pc培养条件，发现添加50μg/ml s-腺苷甲硫氨酸（SAM）、100mg/L N-乙酰氨基葡萄糖苷、80mg/L腐胺 、50mg/L L-半胱胺酸 、50mg/L L—谷胺酰胺、5×10-5mol/L2-巯基乙醇及15%新生小牛血清的IMDM培养基可支持Pc生长并可传代。在37℃，pH 8.0，5%CO2、95%O2条件下，接种新鲜分离的Pc包囊，培养10天，包囊可增殖8～9倍，滋养体可增殖11～12倍，在培养的前3天包囊生长较快，以后滋养体生长较快。经传代培养，包囊可稳定增殖5～6倍，滋养体可增殖8～9倍。冻存2月的Pc包囊，原代培养生长较差，传2 ～3倍代后与新鲜分离的Pc传代培养生长趋势相近。培养21天的Pc滋养体扫描电镜图象显示其表面有皱折，透射电镜图像显示其内部含有丰富的线粒体、内质网以及大量高密度颗粒。2. 应用以上培养体系，建立了筛选抗Pc药物的方法。运用建立的Pc体外无细胞培养方法，选用抗Pc的常用药物喷他脒1.0μg/ml、抗真菌的制霉菌素50μg/ml、抗细菌的庆大霉素400<WP=6>μg/ml处理培养的Pc，检测它们对Pc生长的抑制率从而评估上述培养方法用于药物筛选的可行性。实验结果显示，喷他脒对包囊的抑制率为55.9%，对滋养体的抑制率为64.7%，与空白对照组比较有显著性差异(p<0.01)；而制霉菌素、庆大霉素对包囊的抑制率分别为8.1%、7.7%，对滋养体的抑制率为9.3%、5.6%，二者与空白对照组相比无显著性差异。实验结果与文献报道相符，说明用以上建立的培养方法筛选抗Pc的药物是可行的。3. 应用以上培养体系、药物筛选方法，初步研究了瑞香素体外对Pc生长的抑制作用。瑞香素抗Pc作用效应在1～20μmol/L浓度范围呈剂量依赖关系，10μmol/L瑞香素与1.0μg/ml喷他脒对Pc生长影响效果相当，它们对Pc包囊的抑制率分别为59.3%、56.7%，对滋养体抑制率分别为65.9%、62.3%。若预先将瑞香素与FeSO4按2：1比例混合后，瑞香素对Pc的生长抑制作用大大减弱；而预先与MgSO4以2：1混合后，瑞香素对Pc的生长抑制作用则不减弱，此结果说明瑞香素对Pc的抑制作用与其螯合了Pc生长代谢密切相关的铁离子有关。透射电镜观察，发现经10μmol/L瑞香素作用48h的虫体出现线粒体、内质网肿胀，核膜断裂，胞浆稀薄、空泡、溶解等超微结构改变，这些改变程度随药物剂量增加、时间延长而加重。结 论 建立了Pc体外无细胞培养体系和药物筛选方法。瑞香素对Pc生长有一定抑制作用。