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转录因子是一类可以直接结合或者间接作用于基因启动子而形成具有RNA聚合酶活性的动态转录复合体的蛋白质因子,对基因的表达起抑制或增强的作用。CIB1是最新鉴定得到的一个与CRY2在蓝光条件下特异性相互作用的转录因子。在CRY2存在的条件下,CIB1通过促进成花素基因FT的表达参与调节植物开花。因为CRY1和CRY2的同源性极高,且在植物体内的功能有较多的重叠,因而推测CRY1介导的蓝光信号转导通路中,也很有可能存在与CRY1相互作用的转录因子,参与调节拟南芥中包括去黄化,下胚轴伸长,子叶张开等一系列光形态建成的生理生化反应。于是,我们主要开展了以下研宄,并得到了一些具一定创新性的结果:通过酵母双杂交的方法,从拟南芥转录因子库中筛选出了6个与CRY1相互作用的转录因子。为了测定其中的HB22与CRY1相互作用的强度,采用了ONPG与CPRG两种方法对其(3-半乳糖苷酶活性进行了分析。结果显示在蓝光光强为502(amol/ms,孵育时间为4h的情况下,蓝光与暗处理情况下的P-半乳糖苷酶活性比值分别为1.668和2.18。说明HB22与CRY1的相互作用具有蓝光响应。进一步设置不同时间与光强梯度实验数据显不,在光强为50ja2mol/ms,蓝光孵育时间为3h时,二者相互作用强度达到最高。证明HB22与CRY1的相互作用强度与光强及蓝光孵育时间相关。对蓝光处理不同时间的野生型co/-4与cry J缺失突变体的材料进行HB22基因的定量PCR分析,发现拟南芥cryl缺失突变体中该基因的表达量比野生型中高;在蓝光处理2h时,缺失突变体中表达量为野生型中的6倍左右。说明CWW可能介导蓝光抑制HB22基因表达。对//522进行组织特异性分析,结果显示//522在根、茎、莲座叶、茎生叶、花及果荚5个组织中均有一定量的表达,但表达量有明显差异,在根和花中的表达量较高,其余4个部位中的表达量较低,说明//522可能主要在根和花中起作用。通过酶切连接、农杆菌介导的花序浸染法,获得了3个过量表达//522的转基因拟南芥株系HB22ox2、HB22ox3o成功构建原核表达重组载体pCold TF/HB22,并首次用IPTG诱导表达及SDS-PAGE检测验证,得到大量表达的HB22蛋白。SDS-PAGE电泳结果显示融合蛋白分子质量约为74kDa,表达的融合蛋白存在大量的可溶性表达。对其诱导物IPTG的浓度进行了优化,结果显示IPTG量的变化对目的蛋白的表达无明显的影响。大量可溶性HB22蛋白为进一步研宄HB22蛋白活性的强弱及其抗体制备提供了基础。以上实验结果均显示出CRY1与HB22的相互作用关系,但若要进一步揭示二者之间相互作用机制等信息,则需要更多方面的验证实验,如体外的GST-pulldown以及体内的焚光蛋白显色实验结果来进行深入研宄。而对HB22在拟南芥中的生物学功能研宄则需要对过量表达HB22的转基因拟南芥植株及HB22T-DNA插入突变体植株进行进一步的实验。