目的通过比较课题组涉及的几种不同提取工艺下黄连中生物碱含量的变化,初步确定了七箭处方的提取工艺;优选三七中皂苷含量测定用标准品,三七粒度和鬼箭羽中总黄酮的显色方法,为处方研究提供准确的测定方法;优选水提醇沉工艺和七箭颗粒的成型工艺;考察温度、pH值对三七中人参皂苷Rg1、Rbi和三七皂苷R1的影响;建立七箭颗粒的质量标准。方法整个课题主要包括七箭颗粒的提取工艺、成型工艺和质量标准研究;温度、pH对三七中人参皂苷Rg1、Rb1和三七皂苷R1稳定性的研究。主要采用的方法如下:(1)三七标准品筛选:采用香草醛-高氯酸显色法,分别以人参皂苷Rb1、Rg1、三七皂苷R1及三七总皂苷作为标准品,筛选最佳紫外测定三七总皂苷用标准品。(2)三七最佳粒度筛选:采用高效液相色谱法,测定不同粒度的三七中人参皂苷Rb1、Rgi、三七皂苷Ri的含量。(3)提取工艺筛选:通过正交法设计实验,采用紫外分光光度法测定提取物中总皂苷和总黄酮的含量;用高效液相色谱法测定三七中人参皂苷Rg1、Rb1和三七皂苷R1的含量。(4)成型工艺优化:以颗粒吸湿率、颗粒成型率、软材性状、过筛难易等为考察指标,筛选辅料用量、润湿剂。(5)质量标准建立:运用高效液相色谱法对七箭颗粒进行定量研究、薄层色谱法进行定性研究,制定质量标准。(6)温度、pH值对三七中皂苷类成分影响:采用高效液相色谱法,分别测定不同温度、不同pH条件下三七中人参皂苷Rbi、Rg1、三七皂苷R1的含量。结果(1)三七标准品筛选:经过对人参皂苷Rg1、Rb1、三七皂苷R1、三七总皂苷作为对照品的比较,筛选出三七总皂苷作为测定三七药材中总皂苷的标准品较为合理、准确。(2)三七最佳粒度筛选:不同粒度的三七提取液中,人参皂苷Rb1、Rg1、三七皂苷R1有显著性差异。筛选出过10目筛的三七用于实验。(3)提取工艺筛选:通过正交设计筛选出的最佳提取工艺为:加水14倍,煎煮3次,每次2小时。最佳醇沉工艺为:醇沉浓度为60%,相对密度为1.0-1.15(40℃)。进行三批中试试验。(4)成型工艺优化:以糊精为辅料,干膏粉:糊精=1:1制粒,95%乙醇做润湿剂。(5)质量标准建立:建立三七中人参皂苷Rg1、Rb1,三七皂苷R1的含量测定方法:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,流动相为乙腈和水,梯度洗脱(0～12min 19%乙腈,12～60min 19%～36%乙腈);检测波长 203 nm;流速 1.0 mL·min-1,柱温 30℃。理论塔板数按三七皂苷R1峰计算应不低于4000。建立鬼箭羽等药味的薄层质量标准。(6)温度、pH对三七总皂苷的影响:通过实验研究发现不同温度和不同pH对三七中三种皂苷人参皂苷Rgi、Rb1和三七皂苷R1含量均有较大影响。三七水提液100℃加热12h,人参皂苷Rg1、Rbi、三七皂苷R1都发生了部分转化,其中人参皂苷Rg1和三七皂苷R1有70%以上发生了转化。而单独配制的标准品,三种皂苷对温度和pH都较稳定,几乎不发生转化。结论(1)考察本课题组涉及的黄连不同提取工艺对生物碱提取率的影响,结果表明黄连和其它药物配伍会影响生物碱的煎出,醇沉也会使生物碱含量降低。(2)考察处方的提取条件、成型条件,建立了七箭颗粒的提取工艺和成型工艺;对处方中药味进行了定性和定量鉴别,制定了稳定可靠的质量标准。(3)考察温度、pH值对三七提取液中皂苷类成分的影响,结果表明三七提取液中皂苷类成分不稳定,易受温度和pH值的影响,100℃长时间加热会发生转化。而皂苷单体成分100℃下加热12小时含量变化不明显。由此可知温度不是促使三七提取液中皂苷类成分转化的唯一诱因。本实验选用65℃作为最佳干燥温度。三七粒度对三七中皂苷类成分的提取有一定影响。当三七颗粒较大(大于10目),皂苷类成分提取率低。因此本实验选用通过10目筛的三七。