论文部分内容阅读
[目的]: 研究氯硝柳胺对肺癌细胞放射增敏作用及其机制,为寻求新的能应用于临床的高效、低毒、价廉、患者耐受的放疗增敏剂奠定理论基础。 [方法]:: 1.采用CCK-8法测定氯硝柳胺对非小细胞肺癌(NSCLC) A549、H1299的毒性作用及IC50。肺癌细胞用不同浓度的氯硝柳胺(0、0.25、0.5、1、2、4、8、16、32μmol/L)处理24和48h后测定细胞增值率并计算IC50。 2.采用平板细胞克隆形成实验分析氯硝柳胺对A549、H1299细胞的放射增敏作用。肺癌A549、H1299细胞贴壁生长一天后经过/不经过氯硝柳胺预处理24h后,给予不同剂量的X线照射(0/2/4/6/8Gy),继续培养14天后,计数每一组克隆形成数量并计算放射增敏比。 3.采用流式细胞仪分析氯硝柳胺联合放疗对A549、H1299细胞周期的影响。肺癌A549、H1299细胞贴壁生长一天后经过/不经过氯硝柳胺预处理24h后,给予6Gy剂量的X线照射,继续培养12h后进行PI染色,通过流式细胞仪计算G1/M、G2、S期细胞比率。 4.采用流式细胞仪分析氯硝柳胺联合放疗对A549、H1299细胞凋亡的影响,AnnexinⅤ-FITC/PI凋亡试剂盒对预处理的A549、H1299细胞进行AnnexinⅤ-FITC和PI染色,通过流式细胞仪计算凋亡比率。 5.采用western blotting技术检测氯硝柳胺联合放疗对肺癌细胞VEGF、HIF-1α等蛋白表达水平的影响。 [结果]: 氯硝柳胺对肺癌细胞具有抑制增殖作用,并具有时间-剂量依赖性,A549在24h和48h的IC50是3.368μmol/L和0.99μmol/L,H1299的IC50是1.383μmol/L和0.836μmol/L;氯硝柳胺可以增加放射治疗对肺癌细胞的敏感性:A549、H1299的放射增敏比分别是:2.323和1.684;放疗后A549、H1299细胞G2/M期细胞增加,氯硝柳胺联合放疗后G2/M期明显下降;氯硝柳胺联合放疗组细胞的凋亡比例明显增高(p<0.05);放疗组细胞内HIF-1α和VEGF蛋白表达水平明显增高,氯硝柳胺联合放疗组内表达水平下降。 [结论]: 氯硝柳胺具有增强非小细胞肺癌细胞放射敏感性,其作用机制主要是通过降低放疗后细胞内的HIF-1α和VEGF蛋白的表达从而促进癌细胞凋亡,使其有希望成为新的放疗增敏剂。