目的1.探索从外周血中分离培养自然杀伤细胞(NK细胞)的最佳方法;2.测定NK细胞、CIK细胞以及NK-CIK联合细胞对乳腺癌细胞的杀伤活性并探索联合细胞杀伤活性最强时两种细胞的浓度配比。方法1.抽取健康人外周血,分离外周血单个核细胞(PBMCs),用不同的方法分离培养NK细胞;经流式细胞术检测选出细胞纯度最高的培养方法。2.应用本实验室已建立的方法培养细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)。3.将两种细胞按不同的比例混合,用NK细胞、CIK细胞和混合后的联合细胞分别作用于乳腺癌细胞株和乳腺癌原代细胞,用酶标仪检测各组细胞的细胞毒效应并找出联合细胞中杀伤活性最强的细胞浓度比。结果1.流式结果显示,经磁珠分离PBMC后经培养所获得的NK细胞纯度最高,高达91.51%,可作为纯NK细胞与CIK细胞按不同的比例联合。2.NK细胞对乳腺癌细胞株的杀伤率为68.23%;CIK细胞对乳腺癌细胞株的杀伤率为75.13%。3.联合细胞中NK细胞与CIK细胞的比例为1:1时,联合细胞对乳腺癌细胞株的杀伤率最低,为63.72%,低于单种细胞的杀伤率;比例为1:8时,杀伤率最高,为89.3%,高于单种细胞的杀伤率。结论1.体外分离培养NK细胞和CIK细胞可以得到纯度高、活性好、能够达到治疗量的目标细胞。2.对乳腺癌细胞的杀伤活性,在体外环境下,NK细胞略低于CIK细胞;联合细胞中NK:CIK=1:8时,联合细胞的杀伤活性最大。