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目的本实验拟研究不同方法体外构建的软骨、骨相细胞-支架复合物在裸鼠及大动物体内不同环境下再生特定三维形态骨软骨结构生物髁突的可行性。方法首先,体外构建软骨组织和骨相细胞-支架复合物。软骨组织分别采用两种方法进行构建,方法一:高密度软骨细胞+PGA/PLA软骨支架材料体外诱导;方法二:体外构建软骨细胞膜片。骨相细胞-支架复合物采用BMSCs接种到PCL/HA骨相支架材料上诱导成骨。采用组织学,免疫组化染色和生化分析进行成骨和成软骨的评价。其次,体外构建的两种软骨组织分别和骨相细胞-支架复合物结合(细胞膜片组和双相支架组),分别埋植到裸鼠、小型猪皮下、肌肉下,构建并评价再生生物髁突的组织学结构。最后,采用上述两种方法进行山羊体内髁突原位的生物髁突再生和评价。结果体外两种方法均可以成功构建软骨组织,具有软骨的组织学特征和一定的力学性能。体外构建的骨相细胞-支架复合物,BMSCs具有良好的支架粘附性和成骨潜力。双相支架组和软骨细胞膜片组均可以在裸鼠皮下再生具有骨软骨结构的生物髁突,其中软骨层为连续、均质、单一、无血管的健康软骨,有大量软骨细胞单个或两个并列位于典型的软骨陷窝中,周围为错落排列的糖胺聚糖、胶原纤维等软骨细胞外基质。软骨与骨相支架紧密连接,没有缝隙。骨相支架内有新骨形成。两组没有明显差异。在大动物皮下、肌肉和原位,双相支架组均存在PGA/PLA残留导致的具备炎症反应,均无法再生生物髁突。而软骨细胞膜片组均能够成功再生具有骨软骨结构的生物髁突。再生生物髁突与天然宿主骨结合良好,初步具有骨软骨结构,关节囊上腔完整,没有关节强直发生,山羊下颌活动度约4指,但存在软骨层与关节盘粘连。结论1.软骨细胞膜片和软骨细胞+PGA/PLA支架复合物这两种方法均可以在体外成功构建软骨组织;2.上述两种方法构建的软骨组织和骨相细胞-支架复合物均可以在裸鼠体内成功再生具有骨-软骨结构的生物髁突;3.双相支架组因PGA/PLA残留引起炎症反应不能在大动物体内再生生物髁突,而软骨细胞膜片组无材料引发的炎症反应可以在大动物体内初步再生具有骨-软骨结构的生物髁突。