附红细胞体病是由附红细胞体寄生在多种动物红细胞表面、血浆、骨髓中引起的一种人畜共患病，绵羊附红细胞体病病原是绵羊附红细胞体。该病多呈隐性感染，发病率低，长期以来未引起人们的重视。近年来该病的发病率呈上升趋势，药物治疗不彻底，病情反复难以根除，给养殖业造成严重的经济损失。国内外对绵羊附红细胞体的研究报道较少，有关体外分离培养、分类地位、诊断准确性等问题都亟待进一步研究。本文以自然感染E.ovis绵羊血为试验材料，对绵羊附红细胞体16S rRNA基因进行了克隆、测序，建立系统发育树，从分子水平上确定其分类地位。并且根据所获16S rRNA基因序列设计一对特异性引物，建立了绵羊感染附红细胞体PCR诊断方法，并对其季节流行规律进行了初步研究。在此基础上对绵羊附红细胞体进行了体外培养，为进一步对绵羊附红细胞体代谢过程、生物学特性和免疫机理研究提供理论和实践依据。主要研究内容如下： ⑴通过对绵羊附红细胞体16S rRNA基因与其他相关生物基因组比对分析，找到绵羊附红细胞体16S rRNA基因相对保守区，设计一对引物，对采集疑似绵羊附红细胞体进行16Sr RNA基因PCR扩增及克隆测序。测序结果表明：目的片段长1080bp、1079bp（GenBank收录号EU916726、FJ440328），同源性分析表明该序列与参考序列（AF338268）同源性达99.7％；系统进化树表明，绵羊附红细胞体与其他血营养菌在进化关系上组成一个大的分支，与支原体科，支原体属病原最为接近，与立克次氏体科的病原较远。分析结果与Neimark等提出的观点一致，建议将这类血营养菌归属支原体科、支原体属。 ⑵根据测序得到的绵羊附红细胞体16S rRNA基因序列，设计特异性引物，建立绵羊附红细胞体病PCR诊断方法。特异性试验和敏感性试验表明，该诊断方法与绵羊肺炎支原体、大肠杆菌、葡萄球菌、白色念珠菌、链球菌、枯草杆菌等无交叉反应，检测绵羊附红细胞体最低DNA量为5.2pg，在-80℃存放1年的血样中也检测出了阳性样品。通过临床血样检测，证明该方法可用于本病的早期感染和隐性感染诊断。 ⑶在RPMI-1640、D-MEM、M-199三种培养基中分别添加不同比例的新生牛血清、绵羊血清进行绵羊附红细胞体的体外培养效果比较，以确定最佳培养基与血清浓度。培养结果表明：在RPMI-1640培养液中添加40％新生牛血清，在37℃、5％CO2条件下进行培养，每12h更换一次培养液，进行原代体外培养，得到了优于其他试验组的培养效果，所以首选RPMI-1640作为培养液。 ⑷采用鲜血压片和血液涂片染色镜检结合PCR方法，对石河子地区绵羊进行了附红细胞体感染的流行病学调查。结果显示石河子地区绵羊附红细胞体一年四季均可感染，镜检平均感染率为97％，严重感染率为9.9％，每年1-3月、6月-8月为两个感染高峰期。